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RNA 추출 실험: 원리, 방법 및 순도 분석2025.11.171. RNA 추출 원리 및 중심원리 DNA의 유전정보는 DNA → RNA → 단백질 순서로 전달되는 중심원리(Central Dogma)를 따른다. DNA의 정보가 RNA로 전달되는 과정을 전사(transcription), RNA에서 단백질이 합성되는 과정을 번역(translation)이라 한다. RNA 획득은 유전자 발현의 양상과 메커니즘 연구에 필수적이며, cDNA 제작 및 RT-PCR 등의 실험 수행을 위해 필요하다. RNA는 DNA와 유사한 물리화학적 성질을 가지며, 세포 분쇄, 단백질 분해 제거, RNA 농축 및 검정 순서를...2025.11.17
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식물 조직에서 RNA와 genomic DNA 분리 및 전기영동 분석2025.12.131. 핵산 추출 및 정제 식물 조직에서 total RNA와 genomic DNA를 분리하기 위해 액체질소로 세포벽을 파쇄한 후 TRIzol 시약(phenol과 guanidine isothiocyanate 포함)을 사용하여 RNA를 추출한다. Guanidine isothiocyanate는 RNase를 불활성화시키고, phenol은 DNA를 파괴한다. Chloroform을 추가하여 층을 분리하고, isopropanol로 DNA와 RNA를 침전시킨다. Genomic DNA 추출 시 CTAB buffer를 사용하여 polysaccharid...2025.12.13
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mRNA 추출 실험: 세포 분화와 유전자 발현 분석2025.12.161. RNA 추출 (RNA Extraction) RNA 추출은 세포 내 RNA를 효과적으로 분리하고 정제하기 위한 일련의 단계로 구성된다. Homogenization/Lysis 단계에서 guanidinium과 phenol 용액으로 세포를 파괴하고 RNase를 불활성화시킨다. Phase Separation 단계에서 chloroform을 첨가하여 원심분리로 수층, 유기층, 계면으로 분리하며 RNA는 수층에 존재한다. Extraction/Precipitation 단계에서 isopropanol로 RNA를 침전시키고, Resuspension...2025.12.16
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세포배양, DNA, RNA 추출 실험2025.11.141. 세포배양 (Cell Culture) 세포배양은 자연환경 외부의 통제된 조건에서 세포가 성장하는 과정이다. HEK 293T cell은 부착성 세포로 plate 바닥에 붙어 자라며, 계대배양을 통해 세포를 유지한다. Trypsin-EDTA를 사용하여 세포를 분리하고, 배지를 교체하며 세포를 배양한다. 세포는 초기 3일간 지연기를 거친 후 증식을 시작하여 plate를 채우고, 영양분 부족으로 정상기에 도달한 후 사멸기에 진입한다. 2. Genomic DNA 추출 (gDNA Isolation) Genomic DNA 추출은 세포용해, ...2025.11.14
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[생물공정실험] 3주차 Gene expression analysis by RT-PCR 예비보고서2025.04.261. cDNA 정의 및 합성 방법 cDNA(complementary DNA)는 RNA를 주형으로 역전사효소와 DNA 중합효소에 의해 합성된 DNA입니다. 역전사효소를 이용한 cDNA 합성에서는 RNA와 annealing 위치에 따라 3종류의 primer를 사용할 수 있습니다. (1) 역전사 효소 (reverse transcriptase; RTase), (2) RT반응에 사용하는 primer (oligo dT primer, random primer, gene-specific primer). 2. Downstream applicatio...2025.04.26
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RNA 추출 및 정량 실험 결과 보고서2025.01.041. RNA 추출 실험의 목적은 Trizol을 이용하여 RNA를 추출하고 정제하는 방법을 익히고, 추출된 RNA의 품질과 양을 확인하는 것입니다. 실험 방법으로는 6-well plate에 세포를 준비하고, PBS로 세척한 후 Trizol을 처리하여 RNA를 추출하는 과정이 포함됩니다. 이를 통해 RNA 추출 및 정량 기술을 습득할 수 있습니다. 1. RNA 추출 RNA 추출은 생물학 및 의학 연구에서 매우 중요한 과정입니다. RNA는 유전 정보를 전달하고 단백질 합성에 관여하는 핵산으로, 세포의 다양한 기능을 이해하는 데 필수적입니...2025.01.04
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추위 노출에 따른 백색지방의 베이지화와 갈색지방 활성화 연구2025.11.181. qPCR을 이용한 유전자 발현 측정 qPCR(실시간 정량적 중합효소연쇄반응)은 RNA를 역전사효소로 cDNA로 변환한 후 실시간으로 증폭하는 기법입니다. 본 실험에서는 추위 노출 마우스와 일반 환경 마우스의 지방조직에서 Ucp1, Dio2, Tbp 유전자의 mRNA 발현량을 비교 측정했습니다. RT-PCR 단계에서 total RNA와 oligo dT, dNTP를 반응시킨 후 역전사효소, DTT와 혼합하여 cDNA를 생성하고, 이를 qPCR로 40 사이클 증폭하여 유전자 발현 수준을 정량화했습니다. 2. 백색지방의 베이지화와 갈...2025.11.18
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바이러스 RNA 추출 및 PCR 실험 보고서2025.11.141. RNA 추출 및 정제 바이러스 RNA 추출을 위해 HeLa 세포에 HRV1B를 감염시킨 후 세포를 용해하여 RNA를 분리했다. VB lysis buffer로 세포를 용해하고 AD buffer로 RNA에 염을 결합시켜 침전시킨다. VB column tube의 양전하 필터를 이용해 음전하를 띤 RNA를 분리하고, W1 buffer와 Wash buffer로 세척한 후 Nuclease-free water로 용출했다. 나노드랍을 사용하여 RNA 농도를 측정한 결과 대조군 227.8ng/ul, 실험군 195.2ng/ul로 측정되었다. 2...2025.11.14
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밀도 이용 RNA 추출 실험 보고서2025.05.141. RNA 추출 이 보고서는 RNA 추출 실험에 대해 설명합니다. RNA는 DNA와 달리 일부 정보만을 활용하는 유전 물질로, 단백질 합성에 중요한 역할을 합니다. 실험에서는 Trizol, Chloroform, Isopropanol 등의 시약을 사용하여 RNA를 추출하고 정제하는 과정을 자세히 설명하고 있습니다. 또한 RNA 추출 과정에서 사용되는 시약들의 특성과 작용 원리, RNA 안정성 유지를 위한 DEPC 처리 등에 대해서도 자세히 다루고 있습니다. 2. RNA 구조와 종류 보고서에서는 RNA의 다양한 종류와 구조에 대해 설...2025.05.14
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플라스미드 DNA 정제 및 순도 분석2025.12.161. 플라스미드 DNA 정제 원리 플라스미드 DNA는 세균 내 원형 DNA로, gDNA와의 구조적 안정성 차이를 이용하여 정제된다. 알칼리 조건(pH 12.0~12.5)에서 gDNA는 이중나선이 풀려 변성되지만, 플라스미드는 원형 구조로 안정적이다. SDS와 NaOH를 사용하여 세포를 용해시키고, 아세트산칼륨으로 중성화하면 변성된 gDNA는 침전되고 플라스미드는 상등액에 남는다. 원심분리와 에탄올 침전법을 통해 불순물을 제거하고 플라스미드를 선택적으로 분리한다. 2. NanoDrop 분광광도법을 이용한 DNA 농도 측정 NanoDr...2025.12.16
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