Western bolt

소개

단백질 분석의 기본인 western blot실험입니다

목차

1. Introduction & Abstract
2. Method
1) SDS page(Sodium dodecyl sulfate-polyacryamide gel electrophoresis)
2) Coomasie staining
3. Result
4. Discussion
5. Sliver Staining 조사
6. Chip Assay
7. Reference

본문내용

1. Introduction & Abstract
모든 세포는 외부자극에 의해 특정한 반응을 나타나게 된다. 이러한 반응은 cell안이나 그 밖에 존재하는 수많은 molecule들의 상호관계에 의한 반응들이다. 이러한 일련의 과정들을 우리는 cell signaling이라고 한다. 이러한 cell signaling중에 가장 많고 대표적인 형태가 외부의 단백질형태의 물질의 자극이 recepter를 거쳐 cell로 전달되는 것이 있다. 이러한 반응의 기본은 protein-protein binding인데 이러한 interation을 확인하기 위한 것이 Immunoprecipitation(IP)이다. 우리는 이번 실험을 통하여 Protein간의 IP와 그것을 확인하기 위한 방법인 Western blooting을 직접해보고 결과를 알아보려 한다.

2. Method
우리가 직접 실험했던 과정은 Western blooting의 SDS page와 그것에 쓰이는 Gel을 만들어 보는 것이다. 그리고 거기서 분리된 protein을 확인하기 위한 Coomassie staining을 하였다.
1) SDS page(Sodium dodecyl sulfate-polyacryamide gel electrophoresis)
SDS-PAGE (SDS-Polyacrylamide Gel Electrophoresis)는 polyacrylamide gel은 분자체(molecular sieve)의 역할을 하므로 각 단백질은 거의 그들의 질량에 비례하여 이동한다. SDS를 이용한 전기영동은 질량(분자량)의 크기에 따라 큰 polypeptide는 늦게 이동하고 작은 polypeptide는 빨리 이동되는 현상을 볼 수 있다. 그러므로 단백질의 분리과정을 확인해 볼 수 있을 뿐만 아니라, 이들 단백질의 이동도가 각 분자량의 대수값에 비례하므로 분자량을 이미 알고 있는 표식단백질과 비교하여 분자량을 산출해 낼 수 있다.

참고자료

· http://www.elpisbio.com/sub/support/protocols/Staining.htm
· http://bric.postech.ac.kr/labinfo/qna/query_detail.php?nNum=19989
· http://kin.naver.com/detail/detail.php?d1id=11&dir_id=110205&eid=+P1AVWl2LvD3
· cm3KzeXXBtSLdE/wvz+r&qb=Y2hpcCBhc3NheQ==