고정 물질로 사용되는 것은 미세한 고체, 여과용 물질의 판, 고체 표면에 액체를 얇게 바른 막 등이 있다. 크로마토그래피는 분리하고자 하는 혼합물 속에 들어 있는 각 성분의 수, 성질, 상대적인 양 등에 대해서 사전에 상세하게 알지 못하더라도 혼합물을 분리할 수 있는 유용한 방법이다. 크로마토그래피에 의해 물질이 분리되는 정도는 반응성이 없는 액체나 기체의 흐름에 의해 운반되는 각 성분들이 고정상에 흡수되는 정도가 서로 달라 그 결과 어느 정도 머무르는가에 따라 좌우된다. 이 방법을 사용해 생물학적 기원을 알려주는 화합물(예를 들어 단백질을 이루고 있는 아미노산 조각들이나 펩티드)의 분리, 복잡한 석유 혼합물과 향수·향미료와 같은 휘발성 방향족 화합물(이런 혼합물들은 수백 가지의 성분들로 이루어져 있음)을 분리한다. 크로마토그래피는 미지의 혼합물을 포함하고 있는 기체나 액체(이동상)를 표면적을 크게 만든 흡착제(고정상) 위로 또는 관통하여 흡착제를 통과시킴으로써 물질을 분리한다. 조건을 잘 선택하면 고정상을 통해서 각각의 성분을 분리하고 분리된 성분을 확인할 수 있다.
1931년 R.J.쿤이 카로티노이드 색소의 분리에 이 방법을 사용하여 성공한 이후 급속히 발달하였는데, 흡착 크로마토그래피 또는 흡착분석이라 하여 널리 이용하게 되었다. 또 1941년 영국 A.마틴과 R.싱이 함수(含水) 실리카겔을 흡착제로 사용하고, 물과 섞이지 않는 용매의 아미노산 용액을 흘려 넣으면, 이 두 액체상 사이에서의 분배의 차이에 의해서 각 성분이 여러 장소로 나뉘어 고정되는 분배 크로마토그래피를 발견하였는데, 그들은 1952년 이 업적으로 노벨화학상을 받았다. 현재는 흡착제로서 이온교환수지 등을 사용하기도 하며, 아미노산 ․당 ․펩티드 ․항생물질 ․무기이온 등 거의 모든 물질의 분리 ․검출 ․정량 등에 사용되고 있다. 또 그 방법도 여과지 등 종이에 의한 침투성의 차를 이용하는 페이퍼 크로마토그래피를 비롯하여 많은 방법이 고안되었다.
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