[생화학실험]Preparation of competent E-coil & transformation

소개

DNA가 유전적 형질 전환을 한다는 것을 이해한다.
Competent 된 E-coli를 만든 후 transformation을 해본다.
selection을 하여 다음 3가지 조건을 생각해서 원하는 colony를 선별할 수 있다.
∘ Plasmid가 들어가지 않은 경우
∘ Plasmid가 들어갔으나 plasmid에 원하는 gene이 들어가지 않은 경우
∘ 원하는 gene이 포함된 plasmid가 들어간 경우

목차

■ 실험목적
■ 이론 및 원리
1. Competent cell
2. Transformation
3. Selection
■ 실험 기구
■ 실험 방법
■ 결 과
■ 토의 사항
■ References

본문내용

■ 실험목적
• DNA가 유전적 형질 전환을 한다는 것을 알아보기 위해서 Competent된 E-coli를 만든 후 transformation을 시킨다.

■ 이론 및 원리
1. Competent cell
정상적인 bacteria에 화학적 처리를 하여 DNA가 잘 들어갈 수 있게 만든 cell을 의미한다. ligation을 마친 DNA나 circular 형태의 Plasmid를 증폭하기 위해서, 혹은 cloning을 끝내고 완성된 vector가 있는데 그것을 expression하기 위해서 E.coli에 transformation을 해야 합니다. 이때 사용하는 E.coli host cell을 competent cell이라고 부릅니다. 화학 처리에 쓰이는 시약은 다음과 같이 여러 가지가 있으며 이 중 가장 중요한 것은 calcium chloride이다.
∘ Calcium Chloride
∘ Manganase Chloride
∘ Hexamminecobalt Chloride
∘ Dimethyl Sulfoxide (DMSO)
Competent cell을 이용한 transformation의 과정은 다음 모식도와 같다. CaCl2로 처리하여 competent cell로 만들면 plasmid가 cell에 들어갈 수 있게 된다. Heat shock을 가하면 plasmid 가 cell 안으로 들어가는 효율을 증가시킬 수 있다.
(1) 정의
E.coli를 포함한 대부분의 박테리아는 일반적인 환경에서 극히 제한된 양의 DNA(plasmid, phage)만을 받아들인다. 이러한 종류를 효과적으로 transformation(형질전환) 하기 위하여 박테리아는 DNA를 받아들이는 능력을 향상시키는 물리적, 화학적 형태의 처리가 필요하다. 정상적인 박테리아 cell에 이러한 물리적, 화학적 처리를 하여 외부의 DNA가 잘 들어갈 수 있도록 만든 cell을 competent cell이라 한다.

참고자료

· ∙ 로드니 보이어 저(조성호 역), 생화학의 이해, 월드사이언스, 2004
· ∙ 정병균외 4인, 진단분자생물학, 현문사, 2001
· ∙ Brown, Gene Cloning & DNA Analysis, Blackwell, 2006
· ∙ Joseph Sambrook, David W. Russell., Molecular cloning: a laboratory manual, Cold Spring Harbor, N.Y.: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 3rd ed., 2001
· ∙ Robert F. Weaver 저(박상대 역), 분자생물학, 라이프사이언스, 2003