southern blot과 colony hybridization

소개

서던 블롯(서던 블럿 southern blot)과 colony hybridization 등 2가지 주제에 대해 다룬 레포트

목차

1.southern blot
2.colony hybridization

본문내용

1.Southern blot
Genomic DNA에 존재하는 특정 유전자의 위치는 Southern(1975)이 고안한 transfer 방법을 통하여 결정할 수 있다. 이 방법은 genomic DNA를 하나 혹은 여러가지 제한효소로 자른 다음 생성된 각 DNA 조각을 agarose gel 전기영동하여 크기별로 분리한 후, gel 상에서 DNA를 변성시키고 gel로부터 solid support(흔히 nitrocellulose 혹은 nylon membrane)으로 이동시킨다. 이렇게 gel로부터 membrane으로 이동될 때 DNA조각들의 상대적인 위치는 유지되게 된다. Membrane에 부착된 DNA는 방사선 동위원소 혹은 비방사선 물질로 표지된 DNA 혹은 RNA(probe이라 부름)와 hybridization되고 자가방사법등을 통해 그 위치를 가시화하게 된다. 이러한 기술은 genomic DNA 뿐만 아니라 plasmid의 분석, cosmid, bacteriophage 등의 분석에도 적합한 방법이 될 수 있다.
이 방법을 응용하여 RNA를 분석하는 Northern blot, 단백질을 분석하는 Western blot이 개발되었고, 원리는 크게 다르지 않다. 이들의 분석을 위한 실험과정의 예를 들면 다음과 같다.
1) 시료 준비: 조직이나 세포로부터 DNA, RNA, 단백질을 분리한다.
2) 전기영동: 시료에 따라 일반적으로 사용되는 전기영동 방법은 다음과 같다.
DNA : agarose gel 전기영동
RNA : formaldehyde를 첨가한 agarose gel 전기영동
단백질 : SDS-polyacrylamide gel 전기영동
3) Transfer: 전기영동한 gel은 깨지기 쉬워 다루기 어려우므로 solid support에 옮긴 후 분석 과정을 시행한다. 이 때 solid support에 옮기기 위해 주로 사용되는 방법은 다음과 같다.

참고자료

· http://biochemistry.yonsei.ac.kr
· 한국생물공학회 http://www.ksbb.or.kr