단백질의 정량법

소개

의학, 자연과학을 전공하는 학생들에게 유용한 자료입니다.

목차

단백질 정량법

실험1. UV법(280nm)
실험2. 뷰렛법
실험3. Lowry법
실험4. BCA법
실험 5. Bradford 법

본문내용

단백질 정량법

단백질 농도를 정량하는 방법에는 UV법, Lowry법, BCA법, Bradford법 등이 있다. 각각의 감도, 간편함, 단백질의 종류에 의한 감도의 차이, 방해물질의 종류와 허용농도 및 반응액의 pH 등에 차이가 있으므로 측정할 대상에 따라 적당한 방법을 선택하여야 한다.
UV법은 단순히 단백질 용액의 흡광도를 분광 광도계로 측정하는 방법이다. 단백질에는 주로 tyrosine 및 tryptophan의 측쇄로부터 유래된 280nm 부근의 흡수가 있으나 buffer에는 이 부분의 흡수를 가지는 것이 적기 때문에 이것을 측정한다. 측정법위는 0.1~1mg/ml 정도로서 간단하게 sample의 회수가 가능하다. 하지만 흡수는 tyrosine, tyrptophane의 비율과 입체구조에 의존하기 때문에 광학계수는 단백질에 따라 다르다.
따라서 흡광계수가 미리 알려져 있는 단백질의 농도를 결정할 경우, 먼저 chromatography를 행한 뒤, 어느 부근에 어느정도의 단백질이 용출되는가를 대략적으로 조사할 경우에 적합하다. Column의 끝에 flow cell식의 흡광도계(UV모니터)를 붙이고 연속적으로 단백질의 용출 패턴을 monitor하는 것이 가능하다.
또한 단백질에는 주로 peptide 결합 유래의 205nm 부근의 흡수가 있다. 흡수가 크기 때문에 더욱 고광도로 측정 가능하지만 이 부근의 흡수를 갖는 물질은 굉장히 많기 때문에 흡수가 있어도 그것이 단백질 유래라고는 할 수 없다. 주로 column으로부터 용출된 단백질과 peptide를 UV monitor로 검출할 때 이용된다. Biuret법은 가장 고전적인 비색 정량법이다. Alkali 조건하에서 Cu2+를 단백질 용액과 반응시키면 Cul Lowry법은 Biuret 법을 보다 발전시킨 방법으로 먼저 단백질 용액을 알칼리성 조건하에서 구리이온과 반응시킨 다음 Folin 시약을 첨가한다. 그러면 구리 이온에 의해 phosphate molybdenum acid

참고자료

· 없음