단백질분리정제실험

소개

단백질분리정제실험을 위한 subcellular fractionation, 단백질정제,
Bradford Assay, Lowry Protein Assay, BCA Assay, SDS-PAGE에 대한 목적, 원리, 정의, 장단점 등을 자세히 설명

목차

1.subcellular fractionation의 목적과 원리
1)subcellular fractionation의 정의
2)subcellular fractionation의 목적
3)subcellular fractionation의 원리

2. 단백질 정량의 목적과 원리
1)단백질 정량의 목적
2)단백질 정량의 원리
- Bradford Assay의 원리, 장단점
- Lowry Protein Assay의 원리, 장단점
- BCA Assay의 원리, 장단점

3. SDS-PAGE의 목적과 원리
1)SDS-PAGE의 정의
2)SDS-PAGE의 목적
3)SDS-PAGE의 원리

본문내용

1. subcellular fractionation의 목적과 원리

i)subcellular fractionation의 정의
subcellular fractionation의 목적과 원리에 대해 이야기하기에 앞서 subcellular fractionation의 정의를 알아보자면, subcellular fractionation은 점차적으로 증가하는 속도로 세포를 연속적으로 원심 분리해 세포를 용혈 시키고 세포 이하의 구성요소를 분리해내는 것이다.

ii)subcellular fractionation의 목적
subcellular fractionation은 여러 종류의 진핵세포의 구성요소의 기능을 정의하는 데 있다.
단순히 현미경으로 세포의 구조를 보는 것만으로 세포 이하의 구성요소의 기능을 정의하는 것이 불충분해 세포 구성요소를 분리해 내는 것이 subcellular fractionation이고 subcellular fractionation의 목적이다.

iii)subcellular fractionation의 원리
보통 subcellular fractionation은 세포의 구성요소를 크기와 밀도에 의해 분리하는 differential centrifugation에 의해 수행된다.
- subcellular fractionation의 이전 단계: disruption (분열)
우선 세포의 내부 구성요소가 손상되지 않는 조건으로 원형질막을 분열시킨다. 이때 고주파음에 의한 분해, 균질기를 이용한 분쇄, 고속 blender를 이용한 처리 등이 사용된다. 이 모든 방법들이 원형질막과 세포질 망상구조를 작은 파편으로 분열시키면서 다른 세포소기관은 손상시키지 않는 방법이다.
이렇듯 본격적으로 subcellular fractionation에 들어가기에 앞서 세포 이하의 구성요소를 보존하면서 원형질막을 분열시키는 분열이 수행된다. (figure1의 첫 번째 튜브 부유물 참고)
- subcellular fractionation: homogenization (균질화)

참고자료

· The Cell a Molecular Approach 2nd edition, Molecular Biology of The Cell 4th edition, http://www-class.unl.edu/, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books, http://en.wikipedia.org/wiki, http://www.wfu.edu/