[A+생실리포트] 단백질 추출과 전기영동

소개

이번 실험에서는 전기영동과 DNA의 특성에 대해 알아보고, 직접 전기영동을 하여 그 결과를 관찰하는 데에 목적이 있다.

목차

Object
Materials
Methods
Results
Discussion
-size의 단위, kDa (kilo Dalton)
-Centrifuge
-SDS의 역할
-TEMED의 역할
-Stacking gel and Running gel
Reference

본문내용

Object
전기영동이란 Acrylamide gel 등을 이용하여, 효소로 잘라진 단백질을 전하와 길이에 따라 분류하는 작업이다. 이번 실험에서는 전기영동과 DNA의 특성에 대해 알아보고, 직접 전기영동을 하여 그 결과를 관찰하는 데에 목적이 있다.

Materials
E.coli, 7.5% Polyacrylamide gel, centrifuge, sample buffer, 알코올램프, Size Marker (Invitrogen Mark12 unstained standard), 비커, SDS-PAGE running kit, 1X Running buffer 1L

Methods
1. E.coli(대장균)를 원심분리하여 세포를 다운시킨다.
2. 상층액을 버리고 하층에 남은 덩어리만 남긴 후, sample buffer를 50㎕ 넣어준다.
3. vortexing 하거나 pipeting하여 덩어리를 모두 부순다.
4. water bath에서 알콜램프를 이용하여 5분가량 끓여준다.
5. 10초정도 원심분리한다.
6. Gel sandwich assembly와 module을 조립한다.
7. Running buffer를 10배로 희석하여 module 수조에 부어준다.
8. comb을 조심스럽게 제거하여 well을 확보한다.
9. 가장 왼쪽 well에 파이펫을 이용하여 Size Marker를 10㎕ loading한다.
10. 나머지 well에는 파이펫을 이용하여 Sample을 20㎕씩 각각 loading한다.
11. 250V의 전압을 걸고, 40분간 Running 하도록 기다린다. (단, Running시 module의 밑뚜껑을 반쯤 열어둔다. 밀폐시 Running이 안되기 때문이다!)
12. 5분정도 Coomassie Brilliant Blue R-250으로 staining.
13. 끓는 물에 5분가량 destaining.
14. Gel을 말린다.

참고자료

· 1. Lewis외 저, 전상학 외 역, 2007, 생명과학 길라잡이, 라이프사이언스, p.194
· 2. 위키피디아, http://www.wikipedia.org/
· 3. http://my.netian.com/~jeojoon/sds-page.htm
· 4. 네이버 지식iN, http://kin.naver.com/
· 5. e4u 영한사전, YBM Si-sa