Cell Fraction

소개

Cell Fraction
Astract
이번 실험은 쥐의 간세포를 균질화하여 얻은 균등질을 분별 원심 분리하여, 세포 내 소기관을 크기와 모양에 따라 다른 속도로 실험 tube 밑에 가라앉게 하는 방법으로 각각을 분리하여 핵과 mitochondria를 현미경으로 관찰하고, density-gradient centrifugation으로 균등질을 sucrose의 밀도 구배 위에 놓고 원심 분리하여, 세포 내 소기관의 밀도차를 알아보는 실험이다. Differential centrifugation을 통해 분리한 nuclei는 methyl green으로, mitochondria는 Janus green B로 염색하여 관찰하였는데, nuclei는 약 11.25 um이였고, mitochondria는 약 1~2um정도였다. Sucrose-density centrifugation 결과 희미한 띠가 3군데서 관찰되었다.
Introduction
세포분획
세포 각 부분의 기능은 세포의 구성물을 분리함으로써 이해할 수 있다. 세포내 구성물의 분리과정을 세포분획이라 하는데 먼저 등장액 배지에서 세포를 분쇄하여 균등질을 얻고, 이 균등질에서 소기관과 조각 단편을 분리하는 것이다. 균질화는 정해진 수용성 용액에서 세포를 분쇄하는 것이다. 용액은 0~4℃정도의 온도에서 삼투압(보통 0.25mollm-3설탕)과 pH(약 7.0)을 일정하게 유지하며

목차

Cell Fraction
Astract
Introduction
세포분획
원심분리
-velocity sedimentation 원심분리 in density-gradient centrifugation
-equibrium sedimentation 원심분리 in density-gradient centrifugation
로터
-Swing bucket rotor & Fixed-angle rotor
Methly green & Janus green B
Materials and Methods
°Preparation of mouse liver cell
°Differential centrifuge
°Density gradient centrifugation
°염색 & 관찰

Data and Result
Discussion

Reference

본문내용

Astract
이번 실험은 쥐의 간세포를 균질화하여 얻은 균등질을 분별 원심 분리하여, 세포 내 소기관을 크기와 모양에 따라 다른 속도로 실험 tube 밑에 가라앉게 하는 방법으로 각각을 분리하여 핵과 mitochondria를 현미경으로 관찰하고, density-gradient centrifugation으로 균등질을 sucrose의 밀도 구배 위에 놓고 원심 분리하여, 세포 내 소기관의 밀도차를 알아보는 실험이다. Differential centrifugation을 통해 분리한 nuclei는 methyl green으로, mitochondria는 Janus green B로 염색하여 관찰하였는데, nuclei는 약 11.25 um이였고, mitochondria는 약 1~2um정도였다. Sucrose-density centrifugation 결과 희미한 띠가 3군데서 관찰되었다.


Introduction
세포분획
세포 각 부분의 기능은 세포의 구성물을 분리함으로써 이해할 수 있다. 세포내 구성물의 분리과정을 세포분획이라 하는데 먼저 등장액 배지에서 세포를 분쇄하여 균등질을 얻고, 이 균등질에서 소기관과 조각 단편을 분리하는 것이다. 균질화는 정해진 수용성 용액에서 세포를 분쇄하는 것이다. 용액은 0~4℃정도의 온도에서 삼투압(보통 0.25mol․l․m-3설탕)과 pH(약 7.0)을 일정하게 유지하며, 막을 안정하게 하는 Mg2+, 효소의 활성과 단백질을 보존하는 β-mercaptoethanol, 2.5 mmol․l․m-3을 포함한다. 균등질은 원심분리에 의하여 분리된다. 크기, 밀도, 그리고 모양이 다른 소기관들이나 단편조각을 원심 분리하였을 때, 이들은 각기 다른 속도로 침전하므로 이들의 분리가 가능하다.
Differential centrifugation은 조각 단편들의 혼합물을 크기에 따라 분리하는 것이다. 균등질은 원심력의 상대적 차이에 의해 여러 분획으로 분리된다. 따라서 differential centrifugation의 단점은 항상 다른 조각에 의하여 오염된 침전물을 얻는다는 것이다.
Density-gradient centrifugation은 조각 단편들 사이의 작은 밀도 차이로 이들을 분리하는 것으로 세포균등질을 설탕의 밀도 구배 부위의 위에 놓고 원심 분리한다. 이 경우 튜브에서는 밀도의 구배가 형성되어 시료의 조각단편들은 자신의 밀도구배 내에서 층을 형성하게 되

참고자료

· David L.Nelson, Micheal M.Cox, principles of biochemistry 4th, W.H.Freeman p8
· 박상대, 분자세포생물학 1st, 도서출반 아카데미서적 1998, pp14,36
· 한국분자생물학회, 분자생물학 1st, 도서출판 아카데미 서적 1997, pp18~21