DNA 추출 및 전기영동 실험 방법 및 원리

소개

DNA 추출 과정 및 전기 영동에 대한 상세한 실험 과정 및 재료가 수록되어 있고
각 과정에 해당되는 실험 원리가 있어 보고서 참고 자료나 실험 자료로 유익합니다.

목차

Ⅰ. 세포에서 DNA 추출 원리
(1) 세포 용해의 방법과 원리
- 실험 재료
- 실험 방법 및 원리
(2) 유기적 제거와 효소 분해에 의해 오염물질을 제거하는 방법과 원리
(3) 기타

Ⅱ. 전기영동 원리와 방법과 응용
- 실험 목적
- 실험 방법
- 실험 원리

Ⅲ. 젤에서 DNA 분자를 확인할 수 있는 방법과 원리

본문내용

Ⅰ. 세포에서 DNA 추출 원리
(1) 세포 용해의 방법과 원리
1. 필요시약 :
STET buffer, containing 0.05M glucose, 0.01M EDTA, 0.025M Tris-HCl, pH 8.0, lysozyme (1mg/mL)
방법과 원리 :
EDTA는 대부분의 금속 이온과 안정된 수용성 킬레이트를 형성한다. 그래서 세포벽에 EDTA를 처리하면 세포벽의 본래 모습을 유지하는데 필수적인 칼슘 이온이 제거되어 균열이 일어나고 세포벽이 부분부분 무너진다. 이 때 증류수나 낮은 농도의 용매에 넣어두면 삼투현상이 일어나 세포가 완전히 부서지게 된다. 이것을 방지하는 것이 포도당이고 이것이 삼투압을 유지시켜 세포의 외형을 유지시켜 준다. 이 과정에서 실험상 vortex를 해야 하는데 vortex 중 세포가 모두 깨져버리면 chromosomal DNA가 잘게 깨지면서 plasmid DNA와 구분되지 않는다. 따라서 이처럼 세포를 유지시키면서 세포벽만 부수는 것이다. lysozyme은 세균의 세포벽에 있는 다당류 중의 n-아세틸무람산(NAM)과 n-아세틸글루코사민(NAG)사이의 β-1,4-글리코시드결합을 가수분해하는 효소로 세포벽을 분해하는 역할을 한다.
2. 필요시약 :
0.2몰 NaOH containing 1%(w/v) SDS, Alkaline-SDS solution
방법과 원리 :
SDS는 이온 detergent로 세포막을 부수어주고, NaOH는 DNA를 변하게 한다. 크기가 작은 supercoiled plasmid DNA는 심각하게 변하지는 않는 편이다. 위의 시약들을 넣고 잘 섞으면 세포가 부서지면서 세포 내부의 물질들이 흘러나와 투명하고 끈끈한 suspension이 된다.
3. 필요시약 :
산성용액 - 5몰 Potassium acetate
방법과 원리 :
Potassium acetate는 변성된 DNA를 Renature시키는 역할을 한다.

참고자료

· 없음