Western blotting

소개

Western blotting에 대해 실험에 하고 원리에 대해 알아본다.

목차

1. DATA :
2. Subject : Western blotting
3. Object : Western blotting에 대해 실험에 하고 원리에 대해 알아본다.
4. Intorduction
5. Materials and Methods
6. Result (위에 1조, 3조),(밑에 2조, 4조)

본문내용

1. DATA :
2. Subject : Western blotting
3. Object : Western blotting에 대해 실험에 하고 원리에 대해 알아본다.
4. Intorduction
○ Western blotting은 단백질의 확인과 characterization에 가장 효과적인 방법이다. 이 방법은 polyacrylamide 젤 전기영동 후 membrane으로 transfer 시켜, 분리한 특정 단백질 동정에 항체 특이성을 이용한다. Western blotting에는 특정 단백질, 특정 단백질을 인식하는 1차 항체, 그리고 1차 항원과 결합하면서 확인할 수 있는 signal을 만드는 2차 항체가 필요하다. 오랫동안 방사성 동위원소를 사용하여 확인하였으나 이런 방사성 동위원소를 사용하는 것보다 덜 위험하고 사용이 편하면서도 유사한 민감도를 가지는 새로운 방법들이 사용되고 있다. 이런 새로운 방법에는 light-based detection 방법, autoradiography방법이 있다.
○ Antibody, Transfer, Blocking, Detection
∙ 분석하고자 하는 단백질을 SDS-PAGE 단계에서는 단백질이 고유한 3차 구조를 잃고 linea r 상태가 되어 순전히 분자량에 따라 분리됨.
∙ 분자량에 따른 분리는 전기영동시 glycine과 Tris-Hcl에 의한 수소이온 농도구배를 가져서 단백질이 가진 음전하량에 따른 이동에 의한것
- Transfer
∙ SDS-PAGE로 protein을 분리 후, blotting을 위해 matrix로 옮긴다.
∙ Nitrocellulose, PDVF 및 mylone membrane 같은 filtter에 Transfer
∙ Transfer하는 과정 동안 단백질로부터 SDS가 제거되고, 단백질의 구조가 재생되면서 본래의 항원 결정기를 갖게됨
∙ Transfer되는 과정동안 이동 효율은 분자량에 따라 달라진다. 분자량이 작은단백질은 큰단백질에비해 효율성이 떨어짐.
※ Membrane의 종류

참고자료

· 없음