protein determimation-Lowry 방법과 Bradford 방법

소개

Lowry 방법과 Bradford 방법을 통한 단백질 정량 실험레포트
방해물질 하에 따른 결과.

목차

1.Introduction
1)UV spectroscopy(A280)
2)Lowry 방법
3)Bradford 방법
2.Goals
3. Materials and Methods
1)Materials
2)Methods
4. Results
5.Discussion

본문내용

2.Goals
1) 농도를 알고 있는 단백질을 이용하여 standard curve를 그리고 농도를 모르는 샘플의 농도를 결정한다.
2) 방해물질의 존재하에서 Lowry와 Bradford 방법을 비교한다. 그리고 그것의 메커니즘을 바탕으로 방해되는 이유를 설명한다.

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(1) table 2와 3의 결과에 근거하여 3가지 방해물질에 영향에 대하여 설명하여라. (예를 들면 흡광도에 영향을 준다, 단백질 측정 정확도에 영향을 준다, 등등) 알고 있는 단백질의 구조, 방해물질의 성질 그리고 각 test의 방해가 되는 화학적 반응의 메카니즘등을 바탕으로 왜 특정물질이 특정 test에 영향을 주거나 안주는지 설명하여라.
①Bradford test은 Coomassie blue에 의해 아미노산과 ionic 또는 hydrophobic interaction작용에 의해 단백질을 정량하는 방법이므로 이러한 ionic 또는 hydrophobic interaction작용을 방해하는 물질이 존재하면 test가 제대로 이루어지지 않는다. SDS(sodium dodecyl sulfate)가 들어간 2번과 6번 tube의 경우 2번 tube는 1,3,4번 tube보다는 현저히 높은, 6번 tube는 3,7,8번 tube보다는 현저히 낮은 값이 나왔다. SDS는 강한 detergent로 CH3-(CH2)11-O-SO3-Na+의 분자식을 갖는다. CH3-(CH2)11-O-은 소수성을 띠어 hydrophobic interaction에 관여하고 -SO3은 음이온은 띠어 ionic interaction에 관여한다. 이러한 이유로 SDS는 Bradford test의 방해물질이 된다.
②Lowry test은 티로신과 트립토판이 있는 단백질은 산화되고 Cu이온은 환원되어 그 결과로

참고자료

· 없음