Chloroplast Isolation by differential Centrifugation

소개

연세대학교 생화학실험(1) Chloroplast Isolation by differential Centrifugation 실험 레포트입니다.

목차

1. 실험제목
2. 실험일자
3. 제출자 및 공동실험자
4. 목적
5. 원리
6. 시료 및 기자재
7. 실험방법
8. 실험결과
9. 고찰
10. 참고문헌
11. 숙제

본문내용

4. 목적
Differential centrifuge의 원리를 알고 시금치 잎으로부터 chloroplast를 원심분리해낸 후 chloroplast의 activity를 측정한다.
5. 원리
1). Cell Fractionation
Cell Fractionation의 기본과정은 cell을 깨서 열고(osmotic lysis, enzyme digestion, sonication, grinding with a mortat and pastle, using blender방법들이 사용됨) 원심분리에 의해 각 component를 분리해내는 것이다.
Centrifuge는 molecule, particle, organelle들을 size, density, shape에 의해 분리해내기 위해 사용된다. 원심분리의 원리는 회전하는 물질에는 일정한 원심력이 가해진다는 것이다. 물질은 이 원심력에 대해서 용액 안에서 움직인다.
Differential Centrifuge는 몇 가지 다른 크기의 원심력에서 물질을 회전시켜 물질을 분리해내는 방법이다. Eukaryotic cell은 많은 organelle들을 포함하고 있는데 그 각각은 특수한 기능을 수행하면서 cytoplasm내에 떠다닐 수도 있고 plasma membrane 에 binding 되어 있을 수도 있다. 각각의 cell component 들은 각각 다른 기능을 수행하는 만큼 size, density, shape도 다르므로 이러한 차이 때문에 각각의 organelle 들이 cell로부터 isolation 될 수 있는 것이다. Organelle을 isolation하는 technique중 하나인 homogenization은 cell을 터뜨려서 많은 organelle을 cell로부터 빠져나오게 한다. cell organelle을 살아있는 상태로 유지하기 위해서 phosphate buffer로 완충된 sucrose 용액에서 homogenization 시킨다. 잘 통제된 조건에서는 organelle들이 cell 밖에서도 원래 기능을 계속 수행할 수 있게 된다.

참고자료

· -Biochemistry, 5th, Jeremy M. Berg. p86-87
· (http://blog.naver.com/patricia82.do?Redirect=Log&logNo=80015127803)