단백질 정량 원리와 방법

소개

단백질정량원리와방법에 대한 레포트

목차

1. 뷰렛 시험
2. Lowry 시험 (Folin-Ciocalteau )
3. BCA(Bicinchoninic acid)
4. Bradford 정량방법
5. 분광학적 정량법
6. Kjeldahl 법
7. 자외선 분광광도법에 의한 단백질의 정량법
(1) Warburg-Christian법 (A280/A260)
(2) Waddell법(A215-A225 법)
8. 전기 영동법
9. 방사선 동위원소법

본문내용

1. 뷰렛 시험
1) 원리: 두 개 이상의 펩티드 결합을 가지고 있는 화합물들은 알칼리성 용액에서 묽은 황산구리로 처리하면 자주색을 띠는 물질을 생성한다. 색깔은 구리원자와 두 개의 펩티드 사슬에서 오는 네 개의 질소원자들 사이에서 형성된 배위화합물을 측정한다. 알카리성 CuSO₄와 반응하여 보라색의 착화합물을 만든다. 두 개 이상의 펩티드 결합을 화합물도 마찬가지로 유사한 착화합물을 만들며 단백질의 경우에는 청자색 또는 적자색을 나타낸다. 이 원리를 이용하여 단백질을 정량한다.
보통 이 방법으로는 약 1~10mg의 단백질을 정량 할 수 있지만, 미량뷰렛법은 약 0.25~2.0mg까지 정량할 수 있는 감도를 가진다. 착화합물의 색은 1~2시간동안은 안정하지만, 그 이상의 시간에서는 점점 색도가 증가한다. 시료에 CuSO₄또는 rochelle염과 CuSO₄를 가하여 540~560nm으로 흡광도를 측정하거나 CuSO₄와 NaOH혼액을 시료에 혼합하여 263nm,310nm의 흡광도를 측정하는 방법이다.
이 방법은 단백질의 종류에 따라 발색율의 변동이 적고 시약의 조제, 조작이 간단하나 감도가 나쁘고 다량의 당류가 공존되거나 proline을 함유한 peptide에서는 점색 이 나빠 낮은 값을 나타낸다. 또 유사파장의 공존물질에도 방해된다.
2) 장점: 재현성이 좋다.
3) 단점: 비교적 많은 양(1내지 20mg)의 단백질을 정량 하는데 사용가능하고 소량일 때 불가능하다.

참고자료

· 없음