[자연과학]enzyme activity 측정

소개

단백질 정량을 통한 효소 활성도의 측정

목차

1. introduction
2. procedure
3. Data and result
4. Discussion

효소활성 단위
효소의 반응 특성
Lowry assay

본문내용

효소는 생물학적 촉매로서 화학반응을 촉진시킨다. 촉매란 자신은 변하지 않으면서 화학반응의 속도를 빠르게 또는 느리게 하는 분자이며, 효소-기질 복합체를 형성하여 기질 분자의 구조를 변화시킨다.
enzyme + substrate →enzyme-substrate complex → enzyme + product
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대부분의 경우 효소의 실제 농도를 알 수가 없으므로 효소의 양은 그 활성으로 표시된다. 이때 사용되는 단위가 units로서 효소의 농도는 units/ml로 표시된다. international unit(I.U.)으로 나타내는데 는 기질 1μmole을 최적 조적 하에서 1분 동안 변형(transformation)시키는 효소의 양을 말한다. Specific activity(S.A.)은 효소가 단백질이라는 것을 기초로, I.U.값을 단백질 양으로 나눔으로써 단백질 mg 당 효소의 활성을 나타낸다. 효소의 활성은 위에서 기술한 바와 같이 기질농도, pH, 이온강도, 온도 등에 영향을 받기 때문에 반드시 반응조건이 명시되어야 한다.
이번 실험에서는 intestine과 kidney sample을 이용하여 alkiline phosphatase 의 활성을 정량하였다.
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일반적으로 효소활성은 기질의 농도가 높을수록 높은데 시료 조작에서 발생할 수 있는 오차의 범위를 줄일 수 있도록 기질의 농도를 높게 유지해주는 것이 좋다. 즉, 기질의 소모와 생성물의 증가에 따른 반응속도의 변화를 줄일 수 있다. pH, ionic strength, and temperature도 활성분석에 영향을 주므로 각 효소의 최적 조건에 맞도록 유지 시켜주어야 한다.
Standard curve를 그릴 때 유의할 점은 A=elc(c는 sample의 농도)이므로 O.D와 sample의 농도 plot시에 linear한 그래프가 나와야 한다는 것이다.

참고자료

· 없음