Real Time-Quantitative(RQ)-PCR의 원리

소개

Real Time-Quantitative(RQ)-PCR의 원리와 적응증

목차

Ⅰ. principle
ⅰ) RNA 추출
ⅱ) cDNA 합성
ⅲ) primer 및 probe 설계
ⅳ) PCR 증폭
ⅴ) Quantitative analysis
Ⅱ. diseases for which medicine is efficacious
1) Genomice ▶ 만성골수성백혈병에서 조혈모세포이식 후 미세 잔류 백혈병 monitoring
2) Oncology ▶ 방광암에서 c- erbB2/neu의 증폭 및 과발현
3) infection disease ▶ HBV DNA Quantitation Using Real-Time PCR

본문내용

mRNA(messenger RNA) 발현 단계를 정량하기 위해 Northern blotting, in situ hybridization, RNase protection assays, cDNA arrays, 그리고 reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR) 등 여러 가지 방법들이 이용되고 있다. End-point analysis인 PCR은 주로 PCR 반응 후의 산물을 agarose gel에서 분리해 확인하고 대강의 양을 어림잡는데 그쳤다고 할 수 있으나 정확한 정량을 보다 신속히 할 필요성이 커지고 있다. 실제로 Gene Expression(RNA) Analysis, Gene Copy Assay, Genotyping, Immuno-PCR 등에서 sample에 있는 target의 정확한 측정은 매우 중요하다. 기존의 PCR 시행시에는 명확한 차이점을 결론내기가 어렵다. 왜냐하면 이론적으로 PCR 반응산물은 Cycle이 반복될수록 기하급수적으로 증가하나, 실제 tube안에서는 일정시점에 도달하면 여러 제한요소의 작용에 의해 더 이상의 반응이 없는 Plateau를 보이기 때문이다.
PCR이 개발된 이래로 PCR 산물을 정량하기 위하여 semiquantitative 및 quantitative competitive RT-PCR과 같은 응용 기술이 소개되었으며 semiquantitative RT-PCR은 산물의 양을 실험적으로 결정된 PCR의 cycle 수에 따라 반응시키고 PCR의 interruption에 의하여 반응의 exponential phase 구간에서 측정된다. 이 방법에서는 반응의 exponential phase동안에 PCR 산물을 측정하는 것이 매우 중요하다. 이 방법의 결점은 상대적으로 선형구간이 좁다는 것뿐 아니라 얻어지는 최상의 결과가 semiquantitative하다는 것이다.

참고자료

· 없음