[자연과학]Polymerase Chain Reaction (PCR)

목차

1.introduction
PCR의 주요 도구들.
Gel electrophoresis(젤 전기영동)
RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism)
2. Material & Method
3. Result
4. Discussion
결과해석
PCR에 영향을 주는 여러 요인들.
5. Reference

본문내용

1. Introduction

분자생물학은 그 연구방법의 특성상 실험이 아주 중요한 부분을 차지하고 있다. 즉 분자생물학의 발전은 실험방법의 발달을 그 전제로 하고 있다고 할 수 있을 것이다. 이 때 쓰이는 여러 도구들 중에서 가장 중요한 것 중의 하나가 바로 PCR이다.
이번 실험에서는 각자의 구강세포로부터 추출한 DNA 중 Alu sequence를 PCR을 통해 증폭하고 electrophoresis를 해 본다. 그리고 그 결과를 토대로 polymorphism을 생각해 본다.

◆ PCR은 특정 DNA 부위를 특이적으로 반복 합성하여 시험관내에서 원하는 DNA 분자를 증폭시키는 방법으로서 중합효소 연쇄반응을 통하여 in vitro상에서 특정 부위의 DNA를 105～108배까지 수 시간 내에 증폭시킬 수 있다, 아주 작은 양의 DNA로부터 시작할 수 있기 때문에 다양한 실험에 이용될 수 있다.

PCR은 DNA의 denature, Primer의 결합, DNA의 synthesis의 세 단계를 반복적으로 수행한다. 원래 PCR에 사용되었던 polymerase는 E.coli의 DNA polymerase I 인 Klneow fragment 였는데 이는 DNA를 single strand로 풀기 위해 온도를 올리면 파괴가 되어버리기 때문에 매 cycle마다 enzyme을 다시 넣어 줘야 했었다. 그래서 Kary Mullis는 Thermus aquaticus라는 온천에 사는 미생물에서 추출한 polymerase를 DNA polymerase I 대신에 사용하였다. 이 미생물은 섭씨 72도의 고온에서 생존하므로 그 polymerase역시 72도 이상의 고온에서 파괴되지 않고 활성을 잃지 않을 것이라는 예리한 자연현상의 관찰에서 나온 발견이었다.
이 Taq polymerase의 사용으로 PCR은 sensitivity, specificity, yield, fidelity등 모든 면에서 월등한 향상을 가져올 수 있었고 그 응용범위를 무한대로 넓혀가기 시작하였다.

참고자료

· ◎ Ohhata. M. Y., Kurosu. M. E. Biotechniques 17:726-728,1994.
· ◎ http://opbs.okstate.edu/~melcher/MG/MGW1/MG11124.html
· ◎ http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Search&db=books&doptcmdl=Ge nBookHL&term=SSLP+AND+229301%5Buid%5D&rid=genomes.section.6217#6224
· ◎ http://vm.cfsan.fda.gov/~frf/rflp.html
· ◎ Bernard R. Glick, Jack J. Pasternak, Molecular Biotechnology, 2nd/ed. , ASM PRE SS, 1998. pp. 96~108
· ◎ http://blog.naver.com/psycholyr?Redirect=Log&logNo=90013188810