[생물공학실험]Ligation 과 Transformation

소개

생물공학실험때 작성했던 Ligation & Transformation에 관한 실험레포트 입니다
원리 및 discussion 정리 잘 되어있고 점수도 잘 받은 레포트이니 많은 도움 되시기 바래요*^^*

목차

1.실험제목
2.실험목적
3.실험원리
4.실험방법
5.실험결과
6.discussion

본문내용

실험 목적 :
제한효소에 의해 cutting된 vector와 insert를 ligase를 이용하여 다시 ligation시키고, Competent cell에 transformation시켜본다.

실험 원리 :
1. Ligation
① Ligation : DNA의 단편과 단편을 연결하는 과정을 말한다.
재조합 DNA분자구축의 마지막 단계에 벡터분자와 클로닝 될 DNA의 결합이 일어난다.
② Ligase : DNA단편들을 서로 연결시키는데 사용되는 효소를 말한다. 두 인접한 nucleotide의 3‘ hydroxyl과 5’ phosphate간에 phosphodiester결합을 촉진키는 기능을 하는 ligase를 이용하여 DNA상의 nick을 공유결합적으로 연결한다.
유전자 재조합 과정에 사용되는 ligase는 주로 DNA ligase이며 이 효소는 원핵세포, 진핵세포, 바이러스 등에서 유래한 것이 있는데, 현재 많이 사용되는 ligase는 T4 DNA ligase와 E. coli DNA ligase이다. T4 DNA ligase는 cofactor로 ATP를 필요로 하고, E. coli ligase는 NAD+를 필요로 한다. 이들 두 ligase는 blunt-ended DNA, cohesive-ended DNA, nicked DNA등에 모두 작용할 수 있으나 E. coli DNA ligase 는 T4 DNA ligase와 비교할 때 blunt-ended DNA에 작용하는 힘이 약하므로 일반적인 유전자 재조합 과정에서는 T4 DNA ligase를 더 많이 사용하는 경향이 있다.

참고자료

· 없음