[자연과학]Restriction Digestion, Elution of DNA fragments for Ligation

소개

- Plsmid vector를 restriction enzyme을 이용하여 절단, insert를 삽입할수 있다.
- Insert의 삽입은 Gel electrophoresis에 의해 확인할 수 있다.

목차

1. 실험제목
4. 목적
5.원리
6. 시약 및 기자재
7. 방법
8. 결과
9. 고찰
10.참고문헌

본문내용

① Restriction Enzyme이란?
DNA 분자내의 특정한 염기서열을 인식하고, 인식한 서열내, 혹은 근처의 특정한 부위에서 double strand DNA를 절단하는 균주특이성이 있는 endonuclease이다. 본래 이것은 세포내로 침입해오는 virus나 외래의 DNA를 절단, 제거하는 세균의 방어기작으로 존재한다. 세균은 자신의 DNA의 인식부위를 methylation 시키기 때문에 자신의 제한 효소작용으로부터 보호할 수 있다.
제한효소는 그 특성(절단 양식이나 활성 발현인자 등)에 Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ 형의 3군으로 대변된다. Ⅰ형 효소는 활성 발현에 ATP, S-아데노실메티오닌 및 을 필요로 하고, DNA 속의 인식 염기배열로부터 떨어진 부위를 절단하는데 그 위치는 일정하지 않다. Ⅱ형 효소는 유전공학에서 널리 사용되는 것으로 활성 발현에 을 필요로 하여 DNA 분자의 특정한 염기배열을 인식하고 그 부위 혹은 인식 염기배열로부터 일정 염기 떨어진 인접 부위를 정확하게 절단한다. 또 이 효소의 인식 염기 배열은 3~6개의 회전 대칭구조를 휘하고 있는 경우가 많다. Ⅲ형 효소는 활성 발현에 APT와 마그네슘 이온을 필요로 하고, DNA속의 인식염기 배열로부터 수십 염기 떨어진 부위를 절단한다. 제한효소는 이미 200여종 이상 발견되었고, 생산균주 고유의 특이성을 나타내기 때문에 생산균의 속명의 머리글자 1문자, 종명의 머리글자 문자 및 주명을 붙여 써서 표시한다. 같은 균주가 종 이상의 제한효소를 생산하는 경우에는 순차적으로 로마숫자를 첨가하는 명명법이 널리 사용되고 있다.
restriction enzyme에 의해 절단된 단편의 종류는 bluent end, 5` overhang sticky end, 3` overhang sticky 등의 3가지가 있다.

참고자료

· 킴볼 생화학(John w. Kimvall. 탐구당 1996.)
· Recombinant DNA.
· 실험 생화학 개정 3판, 한국 생화학회(1997)
· 2006 생화학실험2 후반부 교본