Flow cytometry에 의한 세포분석법

소개

의학, 자연과학을 전공하는 학생들에게 유용한 자료입니다.

목차

1. 서론
2. Flow cytometry의 원리
3. 세포 해석상의 주의점
1) 세포현탁액의 조제
2) 형광색소의 선택
(1) Propidium iodide(PI)
(2) Acridine orange(AO)
(3) Hoechst 33342
(4) 7-amino-actinomycin D(7-AAD)
(5) Fluorescein isothiocyanate(FITC)
(6) 그 밖의 형광색소
3) 검출 가능한 파라미터와 그 의의
4. 세포주기의 해석법
1) 실험조작
(1) 시약의 조제
(2) 실험방법
5. 세포표면 항원 및 세포 내 항원의 해석법
1) 세포표면 항원의 정량
(1) 시약의 조제
(2) 실험방법
a. 형광표지 단일클론항체를 이용한 직접 형광항체법
b. 형광표식 2차 항체를 이용한 간접 형광항체법
2) 세포내 항원의 정량
(1) 시약의 조제
(2) 실험방법
6. 세포의 분취
1) 송액계 및 기기의 세척, 멸균법
2) 기기의 조정
3) 세포분취의 주의사항

본문내용

1. 서론
세포생물학에서 세포해석의 원점에서 생각되는 것은 19세기 현미경의 개발에서 시작된다. 현미경 이용에 의해 세포의 구조가 밝혀지고, 더욱이 전자현미경의 등장에 의해서 미소한 세포 내 미세구조와 분자상태 등 해석이 가능하게 되었다.
코흐와 Milatein 등에 의한 단일클론항체의 제작에 따라 리셉터에 대표되는 특정의 세포기능의 해석 및 분리가, 형광표지를 한 단일클론 항체에 의해서 가능하게 되었다. 그러나 이들의 방법에서는 정성적인 해석은 가능하여도, 정량적인 해석과 복수의 다른 파라미터를 이용한 많은 요소 해석 등은 불가능하였다. 더욱이 소수의 특정 세포 종을 많은 세포집단 중에서 분리하는 기술은 존재하지 않았다고 볼 수 있다.
이러한 문제를 훌륭하게 극복한 것이 flow cytometry이다. Flow cytometry는 부유 상태의 세포 또는 염색체 등의 세포성분을 유체계 중에 고속으로 통과시키는 도중에 광학적, 전기적 신호를 검출기로 검출하여 개개의 세포가 갖고 있는 생물학적 특징을 매초 10000개의 속도로 해명하는 것이 가능하다. 해석 가능한 파라미터는 세포의 크기, 형태, DNA양, RNA 양, 표면형질, 염색체 등 여러 가지 이다.
Flow cytometry는 1969년 스텐퍼드 대학 및 캘리포니아 대학 로스앨러모스 과학연구소에서 개발이 시작되었다. Flow cytometry 장치에 총칭되는 형광 활성화 세포선택장치(Fluorescence activated cell sorter:FACS)는 단일클론 항체의 개발과 더불어 1970년대에 눈부시게 진보하였다.
Herzenberg 등은 FACS와 단일클론항체를 이용한 세포아집단의 분류를 시도하고 특히 T 림프구 기능을 해석하는 FACS를 발표하였다. 세포의 표면항원을 특이적으로 인식하는 단일클론항체를 이용한 기술이 널리 사용됨에 따라 여러 가지 분야에서 응용하게 되었다. 임상의학적 분야에서는 말초혈액 림프구의 아집단과 표현형의 해석, 백혈구의 분류와 각종 관련 질환의 감별진단을 증명하는 근거로도 이용되고 이싿.
또한, 세포생리학의 분야에서는 세포표면 마커 뿐만 아니라 세포내의 pH, Ca++ 농도의 측정, 세포주기의 해석, 염색체의 배수성 등의 해석 분리 등에 이용되고 있다. 더욱이 세포공학 분야에 응용은 하이브리도마 등의 배양세포의 기능해석, 유용물질에서 고생산주의 분취수단으로 이용되고 있다.
여기서는 flow cytometry을 세포공학연구에 이용하는 목적과 flow cyteometry의 원리, 기본적인 검체의 조제법과 세포해석법에 대하여 설명한다.

참고자료

· 없음