western blot

*선*
최초 등록일
2007.02.08
최종 저작일
2007.01
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소개글

western blot 의 모든 것 총정리

목차

western blot 의 정의

western blot 은 어디에 사용 되는가?

western blot 의 3단계 및 조건

western blot 방법 설명 및 참고 그림자료

본문내용

Immunoblotting이라고도 불린다. 기본 원리는, cell extracts로부터 특정 protein을 detection하기 위해서 먼저 gel electrophoresis를 이용하여 size별로 분리해낸다. 이 과정에서 protein을 순수하게 size별로 분리해 내기 위해서, protein의 단위 질량당 charge와 3차원 folding 구조를 모두 같게 해줘야 한다. 이런 이유로, protein은 SDS-PAGE(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis)를 수행한다. 이것은, SDS를 detergent로서 이용하여 protein을 모두 단위 질량당 같은 정도의 negative charge를 띠게 해줘서, 각 protein간의 전하 차이를 제거하며, 동시에 folding 구조를 깨뜨려서 shape 차이로 인한 이동 속도의 변화를 없게 해준다. 따라서 이러한 처리를 가해준 protein은 순수하게 size에 해당하는 정도로 - electrode로부터 + electrode를 향하여 migration하게 된다. 이렇게 protein을 size별로 분리해낸 후에, protein을 membrane으로 transferring 시킨다. 이 과정에서도 역시 protein의 전하 특성을 이용하여, - electrode 쪽에는 gel을, + electrode 쪽에는 membrane을 놓게 된다.

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