[생화학]APOE PCR protocol

소개

PCR실험입니다.

목차

APOE PCR protocol
Agarose Gel Electrophoresis

본문내용

Materials
Sterile dH2O
dNTP`s (2mM)
DMSO
10x Supertaqbuffer
Taq DNA polymerase (5U/l)
BSA (10 mg/ml)
APOE-primerset (15 pmol/primer)

Sequence
APOEL-SH: 5`- GCC CCG GCC TGG TAC ACT GC -3`
APOER: 5`- GGC ACG GCT GTC CAA GGA GC -3`

Method
1.0 l DNA or Taillysate
2.5 l 10x Taq pol buffer (=incl 1.5 mM MgCl2)
2.5 l dNTP`s
2.5 l DMSO
1.0 l APOE-primerset
0.2 l BSA
0.1 l/0,033 l Taq pol
15.2 l dH20 (16.2 l when using taillysate protocol)
_____
25.0 l㎕ Total volume

PCR program in MJ PTC-200:

1 92oC 1`30"
2 92oC 30"
3 60oC 30"
4 72oC 1`00" Repeat step 2 4 for 31 times (total 32 cycles)
5 72oC 3`00"

☞ 결과 사진을 볼 때 226bp자리의 띠가 ApoE유전자를 나타내는 것 이다. 조교님께서 유전자가 있는 것과 없는 것을 2개씩 섞어서 조별로 나눠주셨다고 하셨는데, 오른쪽 위의 조만 빼고 모두 DNA추출이 잘 되었다고 생각된다. 유전자가 나타나지 않은 조의 경우, 첫 번째 실험에서 DNA isolation을 잘못하였기 때문에 ApoE유전자가 추출되지 않아 결과적으로 전기영동에서 나타나지 않았다고 생각할 수 있다.

■ 시료 및 용액, 기구
DMSO : Dimethyl sulfoxide
dNTP`s : Base(A,T,C,G)들의 복합 mixture
Taq DNA polymerase : 온천에서만 사는 bacteria에서 추출한 polymerase로써, 높은 온도에서도 활성상태를 잃지 않는 효소이다.
BSA : Bovine serum albumin, 소혈청에서 분리한 단백질
APOE-primerset : PCR의 시작점
PCR program in MJ PTC-200 : 온도와 시간을 입력한대로 PCR과정을 수행하는 기계

참고자료

· 1. PCR실험노트, 저자 Taketoshi Taniguchi 역자 지성길, 월드사이언스, 2002
· 2. 필수세포생물학, 박상대, 교보문고, 2003