[자연과학]Transformation

목차

1. Introduction
2. Materials & Methods
3. Reasults
4. Discussion
5. Review

본문내용

1. Introduction
대부분의 세균 종들은 그들이 성장하는 배지로부터 DNA분자를 uptake할 수 있다.
이러한 방법으로 uptake된 DNA분자는 분해되지만(restriction and modification에
의해) 종종 생존하여 복제될 수 있다. 특히 이러한 현상은 그 DNA분자가 숙주에 의해 인식될 수 있는 복제 원점(replication origin)을 가지고 있는 플라스미드인 경우
나타난다. 플라스미드의 uptake와 안정적인 보존은 플라스미드가 가지고 있는 유전자의 발현을 관찰함으로써 탐지된다. 항생제에 민감한 세균 세포가 항생제-저항성 유전자를 가진 플라스미드를 uptake하여 이 유전자가 발현된 경우, 이 세균 세포의 항생제에 대해 민감한 형질은 저항성을 나타내는 형질로 전환(transform) 된 것이다.
최근 형질전환이라는 용어는 의미가 확장되어 어떤 유형의 세포에 의한 어떤DNA분의 uptake 전부를 지칭하고 있다.

2. Materials & Methods
1). Materials
- Reagents: competent cell 50㎕(E.coli), circular DNA 1㎕(plasmid),
LB broth 450㎕
- Equipments: microfuge tube, micropipette, spreader, incubater,
무균실 (알콜 램프) water bath, timer, plate

2). Methods
① 무균실이나 알콜 램프를 켜놓은 상태에서 competent cell 50㎕에 micropipette를 이용하여 circular DNA 1㎕를 섞는다.
② Ice에서 35min 동안 방치하여 circular DNA(plasmid)가 E.coli에 붙도록 한다.
③ Heat shock을 42℃에서 60sec 동안 시행한다.
④ 무균실에서 손 세척후 LB broth 450㎕를 첨가한다.
⑤ 37℃에서 40min동안 incubation 한다.
⑥ 무균실이나 알콜 램프를 켜놓은 상태에서 균 용액을 LB agar plate에
pipetting 한다.
⑦ LB agar plate위의 용액이 골고루 펴지게 spreading 한다.
⑧ 37℃에서 overnight동안 incubation한다.
⑨ Colony에서 Transformation 된 개체수를 counting 한다.

참고자료

· 없음