Western blotting

소개

Western blotting 전기영동방법에 대한 레포트 입니다

목차

Western blotting
Materials
Pretreated
Method
Detection (ECL법)

본문내용

Western blotting
전기영동 기술은 생체 용액에 있는 개개의 단백질 성분을 분리하는데 기본적인 기술이었 다. 종이나 전분(starch), agarose등이 단단하고, 반응성이 없으며, 대류성이 없어서 전기 영 동 기술에 많이 이용되었으나 현재는 polyacrylamide가 전기영동의 대부분에 이용되고 있다. 그러나 이 재료의 우수성만으로는 특정 단백질의 검출에는 이용할 수 없다. 1979년 Towbin은 전기영동 시킨 polyacrylamide gel로부터 무수한 구멍이 있는 nitrocellulose membrane으로 단백질을 이동시켜 단백질의 항체 검출하는 방법을 고안하였다.
Blotting은 SDS-PAGE에 의해 분리된 단백질들을 모세관 작용 혹은 전기영동 상에 의해 분리젤로부터 지지막(supporting membrane)으로 옮기는 과정을 말한다.
이렇게 하면 gel 내에서 분리되어 있던 거대 분자가 막에 이동되어 똑같은 복제판(replica) 을 가지는 지지막을 얻을 수 있다. 이렇게 옮기는 과정 동안 단백질로부터 SDS가 제거되고 단백질의 구조가 재생되면서 본래의 항원 결정기를 갖게 된다. 여기에 표지 항체를 결합시 켜 지지막상의 단백질의 위치를 확인할 수 있기 때문에 단백질의 크기와 양에 대한 정보를 알게 된다. 이와 같은 방법으로 단백질이 공유 변형(covalent modification)을 일으켰는지 알 수 있다. 즉 phosphotyrosine에반응하는 항체를 표지하여 막에 고정시키면 tyrosine 잔 기에 phosphotyrosine 여부를 확인할 수 있다.
최근에는 화학 발광을 일으키기 위한 효소가 결합되거나 방사성 동위원소로 표지된 항체를 이용한다. 그리고 세포 용해물의 단백질 혼합액 대신 면역 침강 단백질을 이용함으로써 western blot의 감도와 특이성을 증가시킬 수 있다. 이와 같은 기법은 특히 단백질-단백질 상호 작용을 확인하는데 유효하다.

참고자료

· 없음