단백질추출과 전기영동

소개

생실 A받았습니다.
`단백질추출과 전기영동` 입니다.
추가조사는 물론 여러자료들이 많으니
많이들 받아가시고 점수 잘받으세요^^;

목차

1.Introduction
2.Procedure
3.Result
4.Discussion
5.Reference

*추가자료
*생각해볼문제

본문내용

1.Introduction
Acrylamide gel은 DNA 또는 단백질의 전기영동에 이용될 수 있는데, 특히 단백질의 경우는 SDS(sodium dodecyl sulfate)를 포함한 SDS-PAGE(polyacrylamide gel electrophoresis)를 행한다. Polyacrylamide gel은 acrylamide 측쇄 기능기가 N,N`-methylenebisacrylamide와 같은 2개의 기능기를 가지는 화합물에 의해 교차연결(cross-link)되어 형성된 polymer이다. SDS-PAGE의 효과적인 분리 범위는 polyacrylamide의 농도와 교차연결 정도에 의해 결정되며 교차연결 시키는 물질이 없는 상태에서 형성된 acrylamide polymer는 쓸모없는 점액성 용액을 이루게 된다.
Bisacrylamide에 의해 교차연결되어 생긴 gel은 gel 자체의 강도와 탄성을 유지하고 SDS-polypeptide가 통과할 작은 구멍을 형성한다. 이 구멍의 크기는 bisacrylamide : acrylamide의 비율이 증가할수록 감소하여 약 1:20 정도에서 가장 작게 된다. 대부분의 SDS-polyacrylamide gel은 1:29의 몰비율로 제조하며 이 비에서 분자량이 3% 정도의 차이가 있는 polypeptide를 분리할 수 있다.
SDS의 기능을 보면 단백질 내의 소수성 부분에 결합하여 단백질 분자들 간의 소수성 부분의 결합 가능성을 억제시킨다. SDS는 또한 단백질에 많은 음전하를 제공하며, 단백질 내에서의 하전된 group들의 영향을 크게 감소시킨다. 단백질의 sub-unit들은 때로는 disulfide bridges로 결합할 수 있으며, SDS는 이 결합을 깨뜨릴 수 없다. 그러나 전기영동 전에 단백질 시료를 mercaptoethanol을 사용하여 결합을 깨뜨리면 소단위들은 자유로워진다.
보통 SDS-PAGE는 두 가지의 다른 gel이 붙어있는 상태인 Disc(discontinuous pH 또는 disc) gel 전기영동으로 시행하게 된다. 이를 사용하면 단백질 시료가 gel에 apply되었을 때 모든 시료가 같은 점에서 출발할 수 있도록 압축이 되고, 그 다음에 성질에 따라 분리되게 된다. 따라서 두 gel의 농도나 pH가 다르게 설정되어 있다.
윗부분의 gel은 Stacking gel이라 부르며, acrylamide 농도는 주로 3-5%이고 pH는 running gel보다 2 정도 낮은 6.5를 주로 쓰게 된다. 아래의 gel은 Running gel, resolving gel, separating gel 등으로 불리며, acrylamide 농도는 분리하고자 하는 단백질의 크기에 따라 6~15%를 주로 사용한다.

참고자료

· http://kin.naver.com/db/detail.php?d1id=11&dir_id=110205&eid=+/kp3om+LOA7m0OjGIHlulP0F CEhZJr3
· http://blog.naver.com/limarsil?Redirect=Log&logNo=9202581
· http://kr.blog.yahoo.com/sys8876/1241899.html
· 식물의 조직·세포배양, 대한교과서주식회사, 최상진, 1993.
· 생물공학, 경북대학교출판부, 정재동 등, 1992.