2-D 전기영동법을 이용한 단백질분리

목차

1. 주제
2. 실험목적 및 원리
3. 실험방법
4. 이론
5. 고찰
6. 참고문헌

본문내용

주제: Principles and Methods of 2-D Electrophoresis

목적
: IEF (Isoelectric focusing) 분리 (1D) & SDS-PAGE 에 의한 단백질 분리(2D)

원리
1) Pi에 의한 분리 (IEF)
단백질을 분획하기 위한 전기영동법. 등전점을 달리하는 여러 종류의 양성이온 용액에 통전하면 등전점의 순서대로 배열하여 안정한 pH기울기를 형성한다. 여기에 단백질이 공존하면 스스로 등전점과 동등한 pH영역에서 정미의 전하가 0이 되므로 여기에 수속하여 효율이 높은 분리를 달성시킬 수 있다. 미량이면 폴리아크릴아미드겔 내 에서 진행하여 등전점겔전기영동이라고 한다. 대량인 경우에는 칼럼 등을 사용한다.

2) SDS – PAGE (Sodium dodecylsulfate – Polyacylamide Gel Electrophoresis)
SDS-PAGE는 단백질의 순도 검정이나, 단백질 분리, 단백질 분자량 측정 등을 위해 실행하는 기법이다. 분석하고자 하는 단백질 시료에 SDS나 β-mercaptoethanol 등을 가하면 강력히 변성되는 동시에 (–) charge로 하전된다. 일정하게 하전된 단백질 시료는 polyacylamide을 지지체로 하여 전기장을 이용하면 분자량에 따라 gel의 분자 필터링 효과와 전하의 효과에 의해 gel상에 분리된다. 작은 분자량 일수록 빨리 이동하기 때문에 분자량 marker와 비교함으로써 분자량의 추정이 가능해진다. SDS-PAGE는 분리능이 우수하여 western blot 또는 2차원 전기이동(2D)에 이용할 수 있다.

1. 1D (IEF)
1. Sample preparation
a) Protein extraction
- Finely Chopped the sample

참고 자료

김승호 저, 단백질 실험노트 상 추출, 분리 및 재조합 단백질의 발현, 월드 사이언스, 2006.
주 현 저, 프로테오믹스, pmb 범문사, 2004