분자 유전공학 실험 보고서

소개

분자 유전공학 실험 보고서입니다.
실험에 쓰인 사진과 내용 모두 첨부하였고, 참고로 좋은 평가를 받았습니다!

총 10가지의 실헝으로 유전공학을 공부하는 분이시라면,
꼭 필요한 실험들이라고 생각되어 집니다.
【 E. coli culture】
【 P C R 】
【 Gel extraction protocol 】
【 Ligation 】
【 Transformation 】
【 plasmid isolation : Alkaline method 】
【 Restriction enzyme digestion 】
【 Competent cell preparation using calcium chloride 】
【 Agrobacterium plasmid isolation 】
【 Plant DNA miniprep technique 】

- 분자유전공학(Genetic Engineering at nolecular biological level)의 기본 개념은 plasmid biology, vector generation, pharge technology 등의 이론을 바탕으로 목적 유전인자의 성공적인 cloning을 위한 실험전력 및 유전자의 확인, 분리, 검색방법과 고등세포유전자의 미생물세포내 발현을 위한 방법론 문제점 등을 이해시켜주며, DNA purification techique과 재한효소에 의한 DNA 절단 및 target DNA 절편의 분리, plasmid을 이용한 유전자의 직접 cloning을 실험했습니다.

목차

◇ LB 배지 (액체배지 1L 기준) ◇
【 procedures 】
◇ Growh on solid media ◇
【 result 】

본문내용

【 E. coli culture】
【 Date 】2006. 3. 13

【 Material 】

◇ LB 배지 (액체배지 1L 기준) ◇
1. 증류수 850mL를 메스실린더로 재어, 삼각플라스크에 붓는다.
2. 다음과 같은 시약을 저울에 재어, 위의 삼각플러스크에 정량껏 넣어준다.
(ㆍtryptone 10g ㆍyeast extract 5g ㆍnacl 10g )
3. 시약을 넣은 삼각플러스크의 총 volume을 1000mL로 맞춘다. 이때 부족한 양은 증류수로 채워 넣는다.
4. PH를 7.0으로 맞추어 주는데, PH가 높을 경우 HCl을 넣고, PH가 낮을 경우 NaOH를 넣어준다.
5. 고체 배지의 경우 1%의 microagar를 넣어주며, 액체의 경우 넣지 않는다.
6. 살균을 위해 autoclave 에 넣고, 120˚에서 20분 돌려준다.
7. 항생제를 넣어준다.
8. 무균대에서 위의 LB 용액을 Plate에 나누어 붓고, 뚜껑을 반쯤 열어 굳힌다.

*bacterial strain : E. coli DH5a
*Plasmid : 귀리 RNAi

【 procedures 】

◇ Growh on solid media ◇
1. 항생제가 첨가된 4mL의 LB 배지에서 키운 single bacterial colony를, 15ml Tube에 옮긴다.
2. 위의 Tube를 37˚에서 shaking하면서, 밤새 배양한다.
3. colony를 얻기 위해, 루프에 cell 을 묻혀 agar 표면에 일정한 방향으로 긁어서 고루 깔리게 한다.

【 result 】

왼쪽이 내가 배양한 colony이다. 잘 보이지 않지만 하얗고 작은 colony가 여러개 배양된 것을 볼 수 있었다.
사진이 너무 안보여서 비슷한 모양의 colony 사진을 첨가 하였다. (오른쪽)

참고자료

· http://cafe.daum.net/biolaboratory
· 유전공학개론