DNA sample electrophoresis

소개

PCR된 DNA template를 전기영동을 통해 PCR의 결과를 다룬 실험보고서입니다.
전기영동에 대한 자세한 내용도 들어있습니다.

목차

1. Title:
2. materials:
3. purpose:
4. Method
6. Discussion
7. 보충자료
8. Reference

본문내용

4. Method
1) x TAE용액으로 희석하여 99mL에 agarose 1g(1.0%)을 섞어서 1%로 만든다. 열을 가하여 완전 용해시키고, EtBr을 넣고 잘 섞은 후 뜨거운 용액을 식힌 후 젤을 굳히는 판에 붓고 comb을 꽂고 식을 때 까지 기다린다.
2) 잘 섞은 뒤 주형에 넣고 굳혀서 agarose gel을 만든다. (굳힐 때는 comb를 끼워서 well을 만든다.
3) 전기 영동 장치에 1 x TAE를 넣은 후 gel을 넣는다.
4) well의 가장 왼편에 size maker를 넣고 차례로 loading dye와 DNA를 섞은(1:5정도) solution을 주입한다.
5) 전기를 걸어준 뒤 20~30분 기다린다
6) DNA가 내려오면 자외선 하에서 확인한다.

6. Discussion
첫 번째 실험과 이어져서 같이 한 실험 이기 때문에 결과는 같게 나온다. 전기영동을 통하여 자외선 사진을 직접적으로 얻을 수 있었다. 위와 같은 사진은 많이 보긴 하였지만 어떻게 해서 찍는 지와 무엇을 통해서 나오게 되는지 알 수 없었는데 이번 실험을 통해서 제대로 알게 되었다. 처음에는 전기영동을 할 때 DNA가 움직이는 색깔변화에 따라서 나타나는 줄 알았는데 자외선을 통한 사진을 찍어 확인한다는 것을 알았다. 이번에는 전기영동 과정에서 무엇이 잘못되어야 결과가 안나오는지 그 이유를 생각해 보았다.
단백질을 크기 별로 나누는 전기영동 과정이 불완전 했을 때, 전기 영동에 쓰이는 중간 촉매제들에 문제가 있어서 전기영동이 잘 안됐을 때, gel 상에 문제가 있어서 단백질들이 원하는 위치에 제대로 모이지 않았을 때, gel에서 membrane으로 transfer 하는 과정에서 제대로 되지 않았을 때 등이었다.

참고자료

· http://www.uiduk.ac.kr/~kchan/01lecture/016plant_lab/0161week14/electrophoresis.htm
· http://blog.naver.com/redplatypus/40003330631