[자연과학]Real time PCR이란 무엇인가

소개

자연과학을 전공하는 학생들에게 유용한 정보입니다.

목차

1. 개요
2. Real-time PCR의 분석 원리
1) ds DNA binding dye---Nonspecific reporter 사용
2) Fluorogenic probe -- Specific reporter 사용
(1) TaqMan Probe 법
(2) Molecular beacon법
3. Real-time PCR instrumentation
4. Real-time PCR의 분석
5. 정량 방법
1) 절대정량
2) 상대정량
3) Calculation Methods for Relative Quantification
6. 적용분야

본문내용

Real time PCR 이란 무엇인가?

Quantitative Real Time PCR

1. 개요
유전자의 정확한 양을 측정하고 이를 실험이나 임상연구에 이용하는 것은 매우 중요하다. 지금까지 써던 블럿(Southern blot)이나 노던 블럿(Northern blot), RNase 보호 분석법, 영상분석기(Image Analyser)를 이용하여 내재표준유전자(internal control gene)과 증폭주기를 조절한 준정량 증폭반응법(semiauntitative PCR) 등의 방법들이 유전자의 양을 측정하는데 이용되어 왔으나 이러한 방법들도 민감도(sensitivity)가 떨어지고 시간이 오래 걸리며 오염의 가능성이 높으며 부정확하다는 단점 등이 노출되어 실험에 적극 활용하기에는 일정의 한계가 있어 왔다.
1992년 Higuchi 등이 기존의 중합 효소 연쇄반응인 비정량적 측정법의 단점을 극복하기 위하여 염색액(EtBr)를 첨가하여 자외선를 조사한 후 발광하는 형광을 측정함으로써 증폭되어진 이중나선핵산(dsDNA)의 양을 CCD(charge coupled device) 카메라를 통하여 측정하는 방법을 개발하였다.
현재까지의 중합효소 연쇄반응법(PCR)은 주로 PCR 반응 후의 산물을 젤(gel) 상에서 식별하는 종말점 분석(end-point analysis)로 그 결과를 확인하는데 그쳤으며 그 결과 정확한 정량 자료를 얻는 데 한계점을 가지고 있었다. PCR 과정은 DNA 증폭률이 일정하고 재현성이 높은 Exponential Phases를 지나 PCR에 필요한 성분이 점점 고갈되어 증폭률이 감소하기 시작하여 DNA의 양이 산술적으로 증가하는 Linear Phases를 거쳐 PCR이 멈추는 시기로 재현성이 가장 낮은 Plateau phase로 진행된다.
PCR법은 실험재료내의 목적하는 DNA를 극미량 단위까지 검출할 수 있다. 특히 RT-PCR은 미량의 RNA의 검출 등에 그 위력을 발휘한다. 그러나 통상 PCR을 정량에 이용하기에는 증폭산물이 반드시 원래의 주형량을 반영하는 것이 아니기 때문에 단순하게 증폭된 산물로부터 주형의 양을 측정하기는 곤란한

참고자료

· 없음