[생화학]단백질 정량분석(이론)

소개

.단백질을 정량하는 방법에는 여러 가지가 있다. 이는 단백질의 종류와 성질에 따라서 정량하는 방법이 다르다.

목차

개요 및 목적
방법.
1. Biuret Assay
2. Lowry Assay
3. Bradford Assay

본문내용

* 단백질의 정량법
모든 종류의 단백질 농도를 결정할 수 있는 완벽한 방법은 지금까지 알려져 있지 않다. 따라서 단백질의 양을 정량하기 위해서는 단백질의 본질, 단백질 시료에 있는 다른 성분들의 본질, 정량분석의 신속도 및 정밀도 등에 따라서 적당한 방법을 선택하여야 한다. 단백질을 정량하는 방법에는 여러 가지가 있다. 이는 단백질의 종류와 성질에 따라서 정량하는 방법이 다르다.
1. Biuret Assay
1) 원리
단백질의 정성분석방법의 하나인 Biuret 반응의 원리를 이용한 것이다. 정확성은 떨어지지만 신속하게 미량의 단백질을 정량할 필요가 있을 때 많이 이용되는 방법이다.
Biuret(NH2-CO-NH-CO-NH2)은 알칼리성 황산구리(CuSO4)와 반응하여 보라색의 착화합물을 만드는 성질이 있다. 그러므로 Biuret과 비슷한 구조를 지니는 tripeptide 이상의 단백질 관련 물질도 알칼리성 CuSO4와 반응하여 보라색의 착화합물을 만든다. 이때 형성되는 착화합물의 양은 단백질의 농도에 따라 달라지기 때문에 각각의 서로 다른 농도를 지니는 표준단백질용액을 알칼리성 CuSO4와 반응시킨 후 흡광도를 측정하여 기준이 되는 검량선을 작성하고 단백질 농도를 측정하고자 하는 시료용액도 같은 방법으로 처리한 후, 검량선으로부터 시료의 단백질량을 정량하는 것이다.

2) 기구
* 분광광도계 (Spectrophotometer)
흡광광도법으로 이 시험방법은 빛이 시료용액 중을 통과할 때 흡수나 산란 등에 의하여 강도가 변화하는 것을 이용하는 것으로서 시료물질의 용액 또는 여기에 적당한 시약을 넣어 발색(發色)시킨 용액의 흡광도를 측정하여 시료중의 목적성분을 정량하는 방법으로 파장 200～900㎚에서의 액체의 흡광도를 측정함으로써 수중의 각종 오염물질 분석에 적용한다.

3) 시약
① 단백질 표준용액 (BSA)
☞ Bovine serum albumin (소의 혈청 알부민) 10㎎을 증류수 1㎖에 녹인다.
② Biuret 시약
☞ 먼저 CuSO4ㆍ5H2O 1.5g 과 KNaC4H4O6ㆍ4H2O(potassium sodium tartrate) 6.0g을 500㎖의 증류수에 녹이고 10% NaOH 300㎖를 가한 후 증류수를 가하여 1ℓ로 만든다.
③ 미지시료

참고자료

· 없음