[미생물학][미생물학 실험]유산균 DNA Prep

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세포로부터 염색체 DNA를 분리하기 위해서는 먼저 DNA가 세포 밖으로 유출될 수 있도록 세포벽 및 세포막을 분해시켜야 한다. 이때 DNA 가수분해효소들의 활성을 억제하는 조건에서 DNA를 분리해야 하며 단백질이나 RNA가 같이 회수되지 않도록 해야 한다.
세포벽을 가지는 박테리아의 경우에는 먼저 Lysozyme을 처리하여 세포벽을 분해시키며 세포막은 세척제(detergent)인 SDS를 처리함으로써 분해 시킨다. SDS는 세포막을 분해시킬 뿐 아니라 단백질을 변성 시킬수 있어 핵산 가수분해효소들의 작용을 억제 할수 있다. 또한 분리과정중 사용되는 EDTA도 많은 효소의 활성에 필요한 Mg²+ 과 착염을 형성함으로써 효소의 작용을 억제할수 있다.
효소를 포함하는 세포내 단백질들은 proteinase K 에 의해 분해되고 분해된 단백질들은 phenol과 chloroform을 처리함으로써 제거할수 있다. DNA는 알콜에 의한 침전으로 얻을수 있다. 함께 분리된 RNA는 RNase에 의하여 가수분해 되어 제거되고 최종적으로 DNA만을 얻는다.

참고자료

· ◇ Moore, D. (1994) Molecular Biology
· ◇ Finney, M. (1992) Molecular Biology
· ◇ Cooper, T. G (1997) The Tool of Biochemistry
· ◇ Stryer, L. (5th Edition) Biochemistry
· ◇ 한국 생화학회 (1997) 실험 생화학