[발생학]돼지와 소의 IVM,IVF,IVC

소개

체외성숙과 체외수정, 체외배양에 대한 레포트입니다
실험 후 보고서 형식으로 되어있으며 각각의 실험 순서와 원리, 의의를 적어놨습니다. 일단 보시면 후회는 안하실 겁니다.

목차

(1)In vitro maturation
(2)In Vitro fertilization
(3)In vitro culturation

본문내용

이번 실험은 IVM, IVF, IVC였다. 그리고 이를 통해 blastocyst를 갖는 것이 이번 실험의 목적이었다.
실험의 시작은 준비된 난소로부터 aspiration을 하여 IVM을 할 수 있게 만드는 일이었다. 실험의 시작부터 끝까지 조교님이 주의를 주셨던 철저한 소독!!. 알코올로 손을 소독한 후 난자를 18G 주사침으로 일정한 크기의 난포(소: 2~7mm, 돼지: 3~6mm)를 aspiration하였다. 그 후 워싱을 하고 난포액을 원심분리 하여 상층액을 분리했다. selection 과정은 3층의 난구세포층을 갖고 난포세포질이 균일한 것을 고르고 찌그러지거나 지나치게 크고 작은 것, 지나치게 연하거나 검은 것은 제외하였다. 이 과정을 통해 A grade와 B grade에 대해 확실히 구분 할 수 있게 되었다. 생각보다 A grade가 적게 나와서 실망했지만 옆 조 보다는 많이 나와서 그나마 위안이 되었다. 그렇게 COCs(cumulus-oocyte complexes, 난구세포가 부착된 상태)로 meta phaseII 상태로 만드는 IVM을 들어갔다. IVM 배양액은 소의 경우 TCM-199를 사용하고 돼지의 경우 NCSU23을 사용한다. 그리고 plate에 paraffin oil로 피복한 drop을 만드는데 이렇게 drop을 만드는 이유는 배지양이 적게 들고 오염의 소지가 감소되기 때문이다. 그리고 우리가 한 실험방법은 open culture(50wall)방법이었다. incubator 조건은 5%의 CO2, 5%의 O2, 90% N2의 공기조성을 해주었고, 포화습도에 39도시의 조건으로 배양했다. 성숙배양 시간으로 우리가 한 돼지는 36~48시간, 소의 경우 20~24시간이라고 한다.
IVF의 의의는 무엇인가. 이는 체내에서 일어나는 수정과정을 인위적으로 체외에서 재연할 수 있다는 점. 수정란의 대량확보와 인간의 불임치료 및 수정의 메카니즘 규명 등에 이용할 수 있는다는 것이다. 체외 수정의 방법 중 우리가 했던 방법은 아니지만 Percoll처리법이라는 것이 있다. 이는 percol층(90%/45%) 원심분리하여 활력있는 생존정자를 맨 아래층에서 얻는 처리 방법으로 수정률을 높이는 방법으로 생각된다. 수정용액은 기본적으로 BO액, TALP액(소), NCSU23, TCM-199(돼지)등이 사용된다.
IVC는 보통 NCSU-23 배지에서 한다. incubator는 39도에서 5% CO2, 7%의 O2 조건에서 실시했다.

참고자료

· 없음