[생화학]단백질 정량

소개

자연계에는 매우 다양한 단백질들이 존재한다. 그들의 화학적 및 물리적 성질들은 서로 다른 경우가 많다. 예를 들면 머리카락의 주단백질인 케라틴이나 호르몬인 인슐린과 같은 단백질은 분자량과 화학적 조성에 있어서 매우 다르다. 그 밖의 단백질들에 있어서의 화학적 구조의 변이는 검출하기가 어려울 정도로 미미할 경우들이 있는데, 이러한 변이가 생리적 기능에 있어서의 중요한 차이와 관련되는 경우들이 많다. 단백질 구조에 있어서의 이러한 기능의 차이는 분자들에 있어서의 아미노산의 총수나 화학적 성질들의 차이, 단백질에 있어서의 아미노산들의 결합 순서 및 단백질 사슬이 공간에서 접하는 방식 등에 따라서 결정된다. 따라서 단백질들의 생물학적인 기능을 이해하기 위해서는 아미노산과 단백질의 화학을 잘 알아야 한다.

목차

1. 실험 제목
2. 실험 날짜
3. 실험 목적
4. 실험 원리
5. 실험 재료 및 도구
6. 실험 방법
7. 실험 결과
8. 고찰
9. 참고문헌

본문내용

1. 실험목적과 원리
자연계에는 매우 다양한 단백질들이 존재한다. 그들의 화학적 및 물리적 성질들은 서로 다른 경우가 많다. 예를 들면 머리카락의 주단백질인 케라틴이나 호르몬인 인슐린과 같은 단백질은 분자량과 화학적 조성에 있어서 매우 다르다. 그 밖의 단백질들에 있어서의 화학적 구조의 변이는 검출하기가 어려울 정도로 미미할 경우들이 있는데, 이러한 변이가 생리적 기능에 있어서의 중요한 차이와 관련되는 경우들이 많다. 단백질 구조에 있어서의 이러한 기능의 차이는 분자들에 있어서의 아미노산의 총수나 화학적 성질들의 차이, 단백질에 있어서의 아미노산들의 결합 순서 및 단백질 사슬이 공간에서 접하는 방식 등에 따라서 결정된다. 따라서 단백질들의 생물학적인 기능을 이해하기 위해서는 아미노산과 단백질의 화학을 잘 알아야 한다.
<단백질의 정량>
모든 종류의 단백질의 농도를 결정할 수 있는 완벽한 방법은 지금까지 알려져 있지 않다. 따라서 단백질의 양을 정량하기 위해서는 단백질의 본질, 단백질 시료에 있는 다른 성분들의 본질, 정량분석의 신속도 및 정밀도 등에 따라서 적당한 방법을 선택하여야 한다.
<Biuret test>
두 개 이상의 펩티드 결합을 가지고 있는 화합물들은 알칼리성용액에서 묽은 황산구리로 처리하면 자주색을 띠는 물질을 생성한다. 색깔은 구리원자와 두 개의 펩티드 사슬에서 오는 네 개의 질소원자들 사이에서 배위 화합물이 형성됨으로써 생기는 것으로 생각되고 있다. 비우렛 시험은 모든 단백질에 정량하는 데 쓰이는 방법이다.
비우렛(NH2-CO-NH-CO-NH2)은 알칼리성 CuSO4와 반응하여 보라색의 착화합물을 만든다. 두 개 이상의 펩티드 결합을 가진 화합물도 마찬가지로 유사한 착화합물을 만들며 단백질의 경우에는 청자색 또는 적자색을 나타낸다. 이 원리를 이용하여 단백질을 정량한다. 보통 이 방법으로는 약 1~10mg의 단백질을 정량할 수 있지만, 미량 비우렛법은 약 0.25~2.0mg까지 정량할 수 있는 감도를 가진다. 착화합물의 색은 1~2시간 동안은 안정하지만, 그 이상의 시간에서는 점점 색도가 증가하다.
<Lowry test>
Lowry 등이 고안한 이 단백질 정량 분석법은 용액에 있는 단백질뿐만 아니라 건조된 시료에도 이용될 수 있다. 특히 이 정량방법은 5㎍/ml 정도의 단백질의 양을 정량할 수 있는 대단히 민감한 방법이아서 널리 쓰이고 있다. 이 Lowry 방법에서 사용하는 Folin-Ciocalteau 시약에 의한 발색인 비우렛 실험에서와 마찬가지로 단백질과 알칼리성 구리와의 반응에 포스포몰리브덴산-포스포텅스텐산 염들이 단백질에 있는 티로신과 트립토판들에 의한 환원 반응으로 생긴다. 이 두 아미노산의 함량은 단백질의 종류에 따라서 상당히 다르므로 1mg의 단백질에 대한 색의 세기가 일정하지가 않다. 표준곡선을 결정하는 데 사용한 단백질이 나타나는 색의 세기와 다를 수 있다.

참고자료

· 없음