32페이지. 서강대학교 2026년 1학기 현대생물학실험1-효소 활성 분석 100점 A+ 풀레포트입니다!!

소개

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목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Materials and Methods
4. Results
5. Discussion
6. References

본문내용

본 실험은 Escherichia coli (E. coli)의 lacZ 유전자에 의해 암호화되는 효소 (enzyme, E) β-galactosidase (β-gal)를 이용하여 온도, pH 및 기질 (substrate, S) 농도가 E 활성에 미치는 영향을 분석하고, Km과 Vmax를 산출하여 E의 kinetic properties를 분석하는 것을 목적으로 한다. β-gal은 S인 ortho-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside (ONPG)와 반응하여 ortho-nitrophenol (ONP)을 생성한다. ONP는 알칼리 조건에서 황색을 띠며 420 nm에서 최대 흡광도를 가지므로, spectrofluorometer로 420 nm에서의 흡광도를 측정했다. 온도 조건에 따른 흡광도 측정에서는 4 ℃, 23 ℃, 37 ℃, 57 ℃ 조건을 맞춰주기 위해 ice와 water bath를 사용했다. pH에 따른 흡광도 측정에서는 pH 5.0, 7.3, 9.0 조건을, ONPG 농도에 따른 흡광도 측정에서는 100 µM 간격으로 100 µM ~ 600 µM 조건으로 진행했다. 각 sample은 2.5 mM ONPG 100 µl, β-gal 100 µl, pH 조건에 맞는 buffer 800 µl로 조성되었고, 1.0 M Na2CO3가 40 µl가 담긴 e-tube에 각 sample 160 µl을 넣어줌으로써 반응을 종결시켰고, 5분 간격으로 0분 ~ 25분까지 반응시켰다. 5분 단위로 반응한 각sample의 흡광도를 측정했고, sample에서 추세선의 기울기는 Beer-Lambert 법칙에 적용하여 β-gal의 초기 반응 속도 (V0)를 구하는데 사용했다.

참고자료

· David L. Nelson, Michael M. Cox (2021), Lehninger Principles of Biochemistry, 8th Edition, W. H. Freeman and Company, pp. 776-786.
· Mizuki Tomizawa, Kohei Tsumaki, Masaki Sone (2016), "Characterization of the activity of β-galactosidase from Escherichia coli and Drosophila melanogaster in fixed and non-fixed Drosophila tissues”, Biochimie Open, 3, pp. 1-7.
· Julieta M. Sánchez, Iván Ciklic, María A. Perillo (2005), "Effect of partitioning equilibria on the activity of β-galactosidase in heterogeneous media", Biophysical Chemistry, 118, pp. 69-71.
· M. Ladero, A. Santos, J.L. García, F. García-Ochoa (2001), "Activity over lactose and ONPG of a genetically engineered β-galactosidase from Escherichia coli in solution and immobilized: Kinetic modelling", Enzyme and Microbial Technology, 29, pp. 181-184.