서강대학교 2026년 1학기 현대생물학실험1-재조합 단백질 Part1 A+ 풀레포트입니다!!

소개

서강대학교 26년 1학기 현대생물학실험1, 재조합 단백질 Part1에 대한 A+ 풀레포트입니다. 현생실 첫 레포트는 정확한 정수는 기억 안 나는데, 그 뒤인 재조합 단백질 Part2와 효소 활성, 항체 제조 레포트들은 정확하게 높은 점수 받았던 걸로 기억해서 몇 점 받았는지도 함께 적혀 있습니다! 그리고 모두 Part1보다는 점수 더 높았어요! 97점, 100점, 97점으로 기억합니다! 순차적으로 저렴하게 올려놓을테니 구매하셔서 참고하시면 좋은 결과 있을 겁니다!

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Materials and Methods
4. Results
5. Discussion
6. References

본문내용

본 실험은 media와 buffer를 제작하여 Thermus aquaticus (Taq) DNA polymerase를 발현 및 정제에 사용하고 polymerase chain reaction (PCR)을 통해 해당 효소의 정제 여부와 기능적 활성을 확인하는 것을 목적으로 진행했다. Escherichia coli (E.coli)내에 Taq DNA polymerase gene을 포함한 pTTQ18 벡터를 삽입하고 Isopropyl-β-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG)를 이용해 발현을 유도했다. 발현된 단백질은 enzymatic method와 detergent method를 이용해 세포에서 용출했다. 목표 단백질을 침전시키기 위해 곱게 간 ammonium sulfate를 salting out 과정에서 사용했고, 단백질의 변성 억제를 위해 cold room에서 dialysis 과정을 진행해 효소를 정제하였다. 정제된 효소는 PCR 반응을 위해 1X로 두고 resuspension buffer를 이용해 1/4X, 1/16X, 1/64X, 1/256X로 희석해 사용했다. PCR은 변성, 결합, 신장의 반복적인 cycle을 통해 특정 DNA 서열을 기하급수적으로 증폭하는 방법으로, 증폭된 DNA는 agarose gel electrophoresis에서 음전하를 띠는 DNA가 양극 방향으로 이동하는 성질과 크기에 따른 이동성 차이를 이용해 분석했다. 실험 결과 1-1조(본인)와 1-2조에서 1X sample을 loading한 lane에서만 각각 smear 형태의 형광 band와 희미한 band를 관찰할 수 있었고, DNA ladder와 비교해 크기가 약 750 bp인 것을 확인할 수 있었다. 이러한 결과는 본 조의 PCR 반응이 제한적으로 일어났음을 의미하며, Master mix 제조 과정에서의 혼합 불균일, Taq DNA polymerase의 활성 저하 등이 원인으로 생각된다. 이는 효소를 사용 이외에는 ice에 보관해 활성을 유지하고, master mix를 균일하게 혼합해 줌으로써 개선할 수 있을 것으로 판단된다.

참고자료

· Neil A. Campbell, Lisa A. Urry, Michael L. Cain et al(2019), 캠벨 생명과학, 11판, (주)바이오사이언스, pp.404-405.
· 정경숙(2002), 고등학교 과학 교육과정에 기초한 유전자 재조합 기술의 이해, 한남대학교 교육대학원 석사학위논문, pp. 12-15.
· Hülya Kuduğ Ceylan (2023), Enhanced Biomass Production of Recombinant Pfu DNA Polymerase Producer Escherichia coli BL21(DE3) by Optimization of Induction Variables Using Response Surface Methodology, The Protein Journal, 42, pp. 451–452.