서울대학교 생물학실험 모듈2 보고서 A+

소개

2025학년도 1학기 서울대학교 생물학실험1에서 A+(분반 내 전체 1등) 받은 모듈2 보고서입니다.
DNA technology를 주제로, 실험 1. Cloning & Transformation, 실험 2. Colony PCR, 실험 3. Restriction enzyme Digestion and Gel electrophoresis에 관한 내용이 포함되어 있습니다.

목차

Ⅰ. Abstract
Ⅱ. Introduction
Ⅲ. Materials & Method
Ⅳ. Results
Ⅴ. Discussion
Ⅵ. References

본문내용

1. Abstract
본 실험은 DH5α균주에 형질전환을 수행한 후 세 단계의 검증 과정을 통해 형질전환 성공 여부를 평가하고, 각 벡터에 삽입된 insert DNA의 크기를 분석하는 것을 목적으로 하였다. 클로닝에는 pUC19 플라스미드를 사용하였으며, lacZα내 MCS에 서로 다른 insert가 삽입된 재조합 플라스미드 A, B, C를 기반으로 진행하였다. 실험 1에서는 네 종류의 벡터를 E. coli에 형질전환한 후, Ampicillin과 X-gal/IPTG가 포함된 선별 배지에서 배양하여 콜로니 색을 통해 insert 삽입 여부를 식별하였다. Empty 벡터를 도입한 negative control에서는 푸른색 콜로니가, 재조합 플라스미드를 가진 나머지 균주에서는 흰색 콜로니가 나타났다. 실험 2와 3에서는 colony PCR과 EcoRI/BamHI을 사용한 double digestion을 통해 insert의 존재 여부를 분자 수준에서 재확인하고, 각 insert의 크기를 추정하였다. 두 실험에서 수행한 젤 전기영동의 밴드 패턴을 분석한 결과, A, B, C의insert 크기는 각각 약 1.7kb, 600bp, 2.0kb로 나타났다. 또한, 실험 3의 uncut 조건에서 supercoiled 구조로 추정되는 밴드가 관찰되어 DNA의 구조가 이동성에 미치는 영향을 확인할 수 있었다. 이로써, 클로닝 결과의 분석에 시각적 선별 방식과 분자 수준의 검증이 상호보완적으로 이루어질 수 있음을 이해하였다. 나아가, insert의 크기 추정에 필요한 실험 설계에 대하여 클로닝 및 PCR원리와 연결지어 고찰하였다.

참고자료

· Maxim Kostylev, "Cloning Should Be Simple: Escherichia coli DH5α-Mediated Assembly of Multiple DNA Fragments with Short End Homologies", PLOS ONE, 2015, pp. 1-15.
· Campbell 외, 《캠벨 생명과학》, 11판, 전상학 역, 파주: 바이오사이언스, 2019, pp.402-403.
· Ibid., pp. 404-405.