제한효소 예비, 결과레포트

소개

"제한효소 예비, 결과레포트"에 대한 내용입니다.

목차

Ⅰ. 실험 목적

Ⅱ. 실험 이론
1. 제한효소
2. 제한 효소를 이용한 유전자 조작
3. 전기 영동
1) Agarose gel 전기 영동
2) Buffer
3) Agarose gel 의 제조

Ⅲ. 시약

Ⅳ. 실험방법

Ⅴ. 참고사항

Ⅵ. 출처

본문내용

Ⅰ. 실험 목적
- 제한효소를 사용하여 T-vector에 insert DNA 가 들어 있는지 확인할 수 있다.
- DNA 제한 효소를 이용한 DNA의 절단 및 이를 이용한 재조합 DNA의 제조 원리를 알 수 있다.
- 제한효소에 의한 Cell digestion은 Colony, Colony-PCR 색 판별과 함께 형질전환을 확인할 수 있는 방법이다.
- T-vector에 ligation되어 있는 insert DNA (HPRT1 gene)에는 제한효소부위가 없고 insert DNA 양 끝단 가까이에 EcoRI 절단부위가 있어, digestion 후 이들을 전기 영동하면, insert DNA와 insert DNA + T-vector를 분리할 수 있다.

Ⅱ. 실험 이론
1. 제한효소
생체 내에서는 필요에 따라 Nucleic acid 를 합성하기도 하지만 때로는 분해도 한다. 분해의 방법 중 제일 대표적인 것은 없애야 할 Nucleic acid 를 잘라버리는 것이다. Nucleic Acid 를 자른다는 것은 nucleotide 들이 연결되어 있는 phosphodiester bond 를 끊어내는 것을 의미한다. 이런 역할을 하는 효소를 nuclease 라고 하며 바깥쪽에서부터 자르는가 안쪽을 자르는가에 따라서 각각 exonuclease, endonuclease 라고 부른다. Endonuclease 의 대표적인 것이 바로 제한효소(restriction enzyme, restriction endonuclease)이며, DNA 에 존재하는 특정한 염기서열을 인식하고, 인식한 서열부위 또는 그 근처에 존재하는 특정부위를 절단한다. 제한효소는 원래 세균이 자신의 세포 내로 침입해 들어오는 바이러스와 같은 외부 DNA 를 제거하기 위한 방어기전으로 가지고 있는 것이며, 자신의 DNA 는 절단부위의 염기(adenine, cytosine)를 Methylation 시켜서 자신의 제한효소가 자신의 DNA 를 자를 수 없게 보호하고 있다. 제한효소는 여러 종류가 있는데, 보통 DNA 상에서 4 개 이상의 대칭성 염기를 인식하면서 절단한다.

참고자료

· takara.co.kr/web01/product/productList.asp?lcode=D043401 https://www.thermofisher.com/kr/ko/home/life-science/cloning/restriction-enzyme-digestion-and-ligation.html
· https://blog.naver.com/jamogenius/220917798571
· https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC389773/
· https://blog.naver.com/abcd00703/222834745538
· https://terms.naver.com/entry.naver?docId=982675&cid=47339&categoryId=47339
· https://www.attokorea.co.kr/polyacrylamide-gel-electrophoresis-page/
· https://gozar-de-la-vida.tistory.com/395
· https://www.reseat.or.kr/portal/cmmn/file/fileDown.do?menuNo=200019&atchFileId=5686ac6a2213 47819f53736576ed9b06&fileSn=1&bbsId=
· https://local.koreasci.com/download/manual/101_kor.pdf
· https://www.takara.co.kr/web01/product/productList.asp?lcode=D171105
· https://blog.naver.com/PostView.naver?blogId=jeiotech_com&logNo=222123392862&redirect=Dlo g&widgetTypeCall=true&directAccess=false
· https://www.google.com/url?sa=i&url=https%3A%2F%2Fwww.genfollower.com%2F0-2ml-pcr-tube- attached-flat- cap%2F&psig=AOvVaw22v1WY7ff7fUWyk2M9dsRG&ust=1726316666165000&source=images&cd=vfe&opi=89978449&ved=0CBQQjRxqFwoTCNCT-fH0v4gDFQAAAAAdAAAAABAE