[생물학 실험]Agrobacterium 으로부터 plasmid 분리

소개

식물 형질전환에 대한 내용으로 Agrobacterium을 이용한 plasmid 분리 실험의 intro입니다. 다른 싸이트나 책자를 찾아보신 분이면 아시겠지만 Agrobacterium과 crown gall의 내용은 원서에나 어느정도 나와 있을 뿐, 한글 싸이트나 책자가 거의 없습니다.
Agrobacterium, crown gall 에 대한 설명 뿐 아니라. Ti plasmid 의 종류, 구조 및 기능,유전자 지도, T-DNA가 가지고 있는 유전자에 의하여 발현되는 형질을 비롯한 자세한 설명과 함께 plasmid DNA분리에 대한 개괄적 내용, 실험방법, 시약의 이용 등을 작성하였습니다. 물론 그림과 사진도 많이 첨부되어 있어, 절대 후회없는 선택이 될것입니다.

목차

<1> 식물 유전자 운반체
1. Agrobacterium
2. crown gall의 형성
3. Ti plasmid 의 종류, 구조 및 기능
1) Ti plasmid의 유전자 지도
2) T-DNA(trasferred DNA)의 구조
3) T-DNA가 가지고 있는 유전자에 의하여 발현되는 형질

<2> Plasmid DNA 분리
1.Plasmid DNA
2. Plasmid DNA 분리원리
- Plasmid 분리에 사용하는 시약 설명
- Plasmid 분리 실험과정
- 분리한 DNA를 전기영동하여 얻게 되는 결과내용
(Supercoiled(closed circular) DNA와 open circular DNA 설명)

<3> REFERENCE

본문내용

1. Agrobacterium
1980 년대 초부터 이루어진 식물에 외래 유전자 도입과정은 주로 Agrobacterium이 자연계에서 식물에 자신의 DNA일부를 전이시키는 과정을 이용하거나 모방하여 이루어져 왔는데, 우선 Agrobacterium에 의하여 일어나는 자연계의 식물 형질 전환 과정부터 논의하기로 한다. A. tumefaciens와 A. rhizogenes 는 그램 음성 토양 미생물으로써 자연계에서 식물 세포를 형질 전환시켜 crown gall이나 hairy root등과 같은 암조직을 유발한다. 형질전환은 커다란 (200~500 kb) 플라스미드에 기인하며, A. tumefaciens의 경우는 Ti plasmid에 의하며, A. rhizogenes의 경우에는 Ri plasmid에 의한다. 이와 같은 현상을 이용하여 Ti 혹은 Ri plasmid를 근간으로 하는 식물형질 전환 시스템이 개발되었다.

2. crown gall의 형성
암 crown gall 조직은A. tumefaciens가 나자 식물이나 쌍자엽 식물에 상처를 통해 침입했을때 형성된다. 이들 암조직은 무정형으로부터 기형의 독립적으로 살아갈 수 있는 식물에 이르기 까지 여러 가지 이다. 일반적으로 암의 형태는 침입한 박테리아가 숙주 식물체의 호르몬 체계를 어느 수준으로 깨뜨리냐에 달려 있다. 암조직 내의 식물조직은 두가지 특성을 보인다. 첫째는 식물체의 호르몬 존재 여부에 관계없이 성장하며, 둘째는 opine이라 불리우는 새로운 아미노산과 당의 복합체 혹은 인산화된 당유도체를 생성한다. 이러한 opine은 식물체가 이용할수없으며 암조직 주위로 분비되어 주변에 살고 있는 Agro baterium에 의해 흡수분해 되어 질소 및 탄소원으로 사용된다..

참고자료

· 최신 생물과학.
· 최신 식물 생리학.
· http://helios.bto.ed.ac.uk/bto/microbes/crown.htm