[생화학] ELISA (Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay)

목차

[Introduction]
① 간접법
② sandwich법
-The Solid Phase
-Materials for cocting solid phase
-Washing step
-Test Sample
-Conjugates
-Substrate
면역블롯 측정법
[Materials & Methods]
Materials
Methods
[Result]
[Discussion]
[References]

본문내용

ELISA (Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay)
방사성 동위원소를 사용하지 않는 결합 검색법으로는 항체를 이용한 ELISA가 널리 사용된다. 이 경우에는 보통 표준 리간드를 고정시키고 용액상의 수용체나 단백질을 가하여 결합을 유도한다. 결합된 수용체의 양은 수용체에 특이적으로 작용하는 항체를 가하여 결정하는데, 이때 가해진 1차 항체의 양은 색깔을 유도할 수 있는 2차 항체를 가하여 결정한다. 이들 2차 항체는 항체의 꼬리 부분을 인지하는 항체인데, 2차 항체의 꼬리에는 알칼린 포스파타제나 peroxidase 등의 효소가 연결되어 있고, 이들 효소의 작용으로 용액속에 색깔을 유도하는 것이다.

① 간접법 : 수용성항원 또는 세포를 우선 solid phase인 평판구멍(plate well)에 부착시킨 다음 이들에 특이한 1차항체, 그리고 1차항체에 특이한 효소가 표지된 2차항체(alkaline phosphatase 또는 peroxidase)를 순차적으로 반응시키고 상기한 효소에 대한 기질을 첨가했을 때 나타나는 색깔로 항원에 대한 특이 항체의 존재를 확인하는 방법이다.
② sandwich법 : 극소량의 항원에 존재를 확인하고자 할 때 이항원에 대한 존재를 확인하고자 할 때 이 항원에 특이한 항체(1차 항체)를 평판구멍에 먼저 부착시키고 다음에 항원, 항원에 대한 또 다를 특이항체(2차항체), 그리고 2차항체와 반응할 수 있는 효소로 표지된 항체(3차 항체)를 차례로 반응시키어 항원을 검출하는 방법이다. 이 방법으로 항원의 양을 정량할 수 있다

참고자료

· 없음