[진핵생물실험] 담배의 특정 gene(DEK)을 virus-indeced silencing시켜서 그 결과를 확인

소개

2004년도 진핵생물실험 레포트 입니다.

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본문내용

이번 실험은 담배의 특정 gene(DEK)을 virus-indeced silencing시켜서 그 결과를 확인하는 실험이었다. 특별히 RT-PCR이라는 방법을 사용했는데, 담배에서 DEK gene이 silencing이 되었는지를 확인하기 위함이다. DEK gene은 RNA로 transcription 되는데, VIGS가 일어난 NbDEK plant에서 RNA를 추출하고 역전사효소를 이용해 cDNA를 합성하고, 이를 gel상에 로딩해 band를 확인함으로써 silencing 여부를 확인하는 것이다.
조교님이 주신 map을 보면 DEK-A와 B는 각각 Cys P와 Ⅲ를 바탕으로 제작한 primer다. 이 두 primers로 PCR을 실시하고 gel 상에서 확인을 했기 때문에 band가 뜬다는 것은 각각 Cys P와 Ⅲ부분이 존재한다는 것을 의미한다.
먼저 결과 B의 첫 번째 lane에서 control인 TRV를 살펴 보면 band가 DEK-A와 B 둘다에서 확인되었고 이를 통해 Cys P, Ⅲ 부분이 모두 존재한다는 것을 알 수 있다. 그렇지만 많은 양은 아니라서 band가 희미하게 보인다.
다음으로 TRV:DEK(1) plant는 Cys P와 Ⅲ 부분이 강하게 발현된 것을 확인할 수 있다. map에서 Cys P와 Ⅲ 부분이 존재하는 것에 일치하는 결과라 할 수 있겠다. Band가 진하게 나온 것으로 보아 control인 TRV에서보다 이 부분이 많이 발현되는 것 같다. 이것은 아마도 Cys P와 Ⅲ를 삽입해서 overexpression 시켜서인 것 같다.

참고자료

· 없음