[화학과, 화학공학과, 화학생명공학과, 생물] HLPC

소개

1. 이 론
2.장 치
3. 시료의 분석
4. 기기 및 장치
5. 사용방법 및 주의사항

목차

1. 이 론
2.장 치
3. 시료의 분석
4. 기기 및 장치
5. 사용방법 및 주의사항

본문내용

▶ 고성능 액체 크로마토그래피법 (high performance liquid chromatograhy)

일반적으로 500 ～ 5,000 psi 의 압력으로 일정하게 이동상 용매를 흘려주는 펌프를 사용한다. 중력 액체 크로마토그래피법에 비하여 HPLC 의 가장 명백한 이점은 시료가 더욱 신속하게 분리되어진다는 점이며, 그 외에도 비휘발성이거나 기체 크로마토그래피법에서 열적 분해가 일어나는 시료를 신속하게 일상적으로 분리시킬 수 있다는 점이다. 결과적으로 유력한 이 분석법이 기체 크로마토그래피법을 보완하고 있다고 하겠다.
HPLC 는 고정상인 입자들로 채워져 있는 관을 통과하는 액체의 흐름(이동상)속으로 소량의 액체시료를 주입하는 방법이다.
액체 크로마토그래피법은 기체 크로마토그래피법에서와 마찬가지로, 혼합물을 이루고 있는 각 성분들의 분리가 관속에서 각 성분들의 머무름 정도 차이에 의존한다. 한 성분이 관속에서 지연되어지는 정도는 액체 이동상과 고정상간의 분배에 의하여 결정되어 진다. 여러 가지 다른 고정상과 이동상을 이용함으로써 HPLC 의 다양한 분리방법이 발전되고 있다.

▶분배 크로마토그래피법

분배형의 HPLC는 액체 이동상과 고정상인 고체입자들에 결합되어져 있거나 입혀져 섞이지 않는 액체 사이에 용질이 분배된다. 액체 고정상에 더욱 강하게 분배되어 있는 화합물은 더 오랫동안 관 속에서 머무른다. 만약 고정상이 이동상보다 극성이 크면 정상상(normal phase) 크로마토그래피법이라고 하며, 이동상이 고정상보다 극성이 크면 역상(reverse phase)크로마토그래피법이라고 한다. 고체지지체 입자에 입혀진 액체가 고정상이 될 수도 있다. 결합상(bonded-phase) 분리관은 고체지지체에 화학적으로 결합되어 있는 고정상으로 채워져 있으며, 분배 크로마토그래피법에서 가장 일반적으로 이용하는 분리관이다.
예를 들어, C18 분리관이라 불리는 관을 만드는 데는, n-octdecane을 실리카 표면의 OH- 기에 반응시켜, 직접 실리카에 결합시킨다. 고정상에서 용질의 분배정도는 용매의 극성을 변화시킴으로서 조절할 수 있다.

▶ 흡착 크로마토그래피법

흡착크로마토그래피법은 수화된 실리카 또는 알루미나 입자들과 같은 극성을 띤 고체 고정상을 이용한다. 이동상과 용질(시료의 성분들)은 고정상 입자들 위에 활성 흡착자리를 차지하기 위해 경쟁을 한다. 그러므로 더욱 강하게 흡착하는 성분들은 약하게 흡착하는 성분들보다 더 오랫동안 머무르게 된다.
극성이 큰 화합물을 극성이 작은 화합물보다 극성표면에 더욱 잘 흡착하므로 분리관에서의 머무름(retention)은 시료의 극성에 관계가 있다.
또 머무름은 흡착할 자리를 차지하기 위해 시료 성분들과 경쟁하는 이동상의 극성에 의하여 조절되어질 수도 있다. 그러므로 극성이 큰 이동상은 흡착하고 있는 용질의 분자들과 효율적으로 치환(교환)되어 머무른 시간이 감소하게 된다. 용매의 극성이 큰 것은 극성크기의 순서가 낮은 것을 치환한다.

참고자료

· 없음