[환경유전체학] 병원성 미생물의 검출방법

소개

발표 잘해서 A+ 맞았습니다.

목차

1. 식품미생물 검사
1)식품미생물 검사개요
2)대표적 병원성 미생물 검사방법
3)균분리 및 동정
4)혈청학적 검사
5)신속검출기법
6)기타 병원성 대장균
7)살모넬라(Salmonella spp.)균의 검출 예
8)식품미생물 검사 사진(식품미생물 전자현미경 사진)

2.미생물검출 Kit 및 장비의 이용기술
1)Screening Kit
2)3M Petrifilm(美, 3M) -Biochemical Tecnonlogy
3)VIP Kit(美, Bio Control System, Inc) ,
REVEAL TEST KIT (IMMUNOLOGICAL TECHNOLOGY)
4)PCR PRIMER (TAKARA 일본) Thermal Cycler (PCR) (Molecular biology Technology)
5)Rodac plate(Biochemical Technology)
6)IDENTIFICATION KIT
7)Screening Kit + INDENTIFICATION KIT
*출처: http://www.bion21.com/Korean/p3_1a.html

3.주요병원성 미생물(간단히 학명 위주)
*출처: http://www.bion21.com/Korean/p3_1a.html

4.PCR(polymerase chain reaction)
1)센트럴 도그마
2)PCR이란
3)Polymerase Chain Reaction의 원리
4)PCR 3단계
*출처: http://home.mokwon.ac.kr/~nschang/intro/room/protocol/33.html
http://my.netian.com/~jeojoon/pcr.htm

5. 새로운 미생물 검출 기술 개발
*출처:Bio Online Research News, http://www.bio.com

6. 병원성 미생물 검출 올리고칩
*출처:
http://www.biotechcenter.org/tech/dev_a1_view.php?ID_No=214&c=c4&page=1&search=&keyword=

7. 이지바이오, 미생물진단시약 4종 개발(사례분석)
*출처: 2000년 08월 27일 (일) 12:56, 매일경제신문

8. Molecular Beacon Polymerase Chain Reaction Detection of Eschericha coli O157:H7 in Milk
*출처: J. Food Protec. 63(7) 2000. pp855-859

9. DNA Chips에 관하여
*출처 명의정 제 25호 (2000. 3. 20)
황 평 한 부교수/동문5회
전북대학교의과대학소아과학교실


10. 앞으로 나아가야할 나의 생각

본문내용

4. PCR(polymerase chain reaction)
*Purpose:유전물질로서의 DNA의 중요성을 알고 DNA를 증폭하는 원리를 익힌 후 실험과정을 수행.
1)센트럴 도그마:DNA와 RNA와 단백질 사이의 정보의 흐름을 나타낸 것. ‘중심 명제’라고도 한다. DNA의 유전 정보는 RNA에 전달되고 또 RNA에서는 단백질로 전달된다. 거꾸로 단백질에서 핵산으로, 또는 단백질에서 단백질로 정보가 전달되는 일은 없다. :DNA의 이중 나선 구조를 발견한 사람 가운데 하나인 크릭은 1958년 이것을 생물의 일반 원리라고 하여 ‘센트럴 도그마’라는 말로 표현하였다. 이 흐름은 다음과 같이 나타낸다.

DNA ―→ RNA ―→ 단백질

:그 후 바이러스의 일부에는 RNA에서 DNA로 전사를 행하는 역전사 효소를 지니는 것이 있다는 것과 RNA에서 자기 복제하는 기능이 발견되면서 현재는 다음과 같이 수정되고 있다.
DNA에서 RNA까지 이루어지는 정보의 흐름은 ‘전사(translation)’, RNA에서 단백질로 전해지는 정보의 흐름은 ‘번역(transcription)’이라고 한다.

2)PCR이란:DNA 또는 RNA의 특정영역을 in vitro상에서 대량으로 증폭하는 것을 말하며, polymerase chain reaction을 말한다.
3)Polymerase Chain Reaction의 원리
:DNA의 양쪽 가닥을 Template로 하여 원하는 DNA를 증폭시키는 방법으로 Genomic DNA로부터 원하는 DNA 부분을 선택적으로 증폭시켜 Agarose gel 또는 Polyacrylamide gel을 이용하여 Band를 확인하게 된다.
4)PCR 3단계

* Pre-PCR status

첫번째,DNA변성(Denaturation) :

두가닥의 DNA를 95oC정도에서 15-30초간 처리하여 각각의 한가닥 DNA로 해리시킨다

두번째,annealing(Annealing: Primer의 결합) :

열처리로 변성된 한가닥 DNA에 primer가 상보적인 위치에 annealing하게 된다. Annealing 온도와 시간은 primer의 염기배열과 길이에 따라 결정된다. 통상의 경우 45oC-60oC사이에서 이루어진다.
세번째,신장(Extension) :

한가닥 DNA에 primer가 상보적으로 결합한 상태에서 보통은 Thermus aquaticus (Taq) polymerase를 이용하여 신장시킨다. Extension 시간은 증폭하고자 하는 주형 DNA크기에 비례하여 조정한다. Taq polymerase에 의한 DNA 합성속도는 약 60 nucleotides/sec(70oC)이다.
※ Double strand로 되어 있는 Template를 고온(95도)에서 Denaturation시키고, 변성된 Single stranded DNA에 Primer를 낮은 온도(50-65도)에서 결합 시킨 뒤(Annealing), 72-75도에서 Polymerase가 Primer로부터 DNA를 합성하는 세가지 단계를 반복적으로 기계를 이용하여 시행함으로써 증폭된 DNA를 얻게 된다. 이 때 사용되는 Polymerase는 고온에서 번식하는 Taq (Thermus aquaticus)와 같은 세균의 DNA polymerase를 이용한다.

http://home.mokwon.ac.kr/~nschang/intro/room/protocol/33.html
http://my.netian.com/~jeojoon/pcr.htm

참고자료

· 없음