[생명공학실험]Ligation of DNA(예비&결과레포트)

소개

정말 열심히 만든 자료입니다. 많은 도움이 됐으면 합니다.

목차

예비(1) 실험 제목
(2) 실험 목적
(3) 실험 원리
(4) 실험 방법
(5) 실험 재료
(6) 참고 문헌
결과(1) 실험 제목
(2) 실험 목적
(3) 실험 내용
(4) 실험 결과
(5) 토의 및 고찰

본문내용

(3) 실험 원리
① Ligation : DNA나 RNA의 끝을 이어주는 과정을 가리키는 용어이다. 이 반응에 이용되는 효소를 ligase라 하며 DNA를 기질로 사용 하는 ligase를 DNA ligase, RNA를 기질로 사용하는 ligase를 RNA ligase라 한다.
①-1 Ligase (DNA ligase) : 세포내 이중가닥 DNA 분자 중에서 단일가닥된 불연속을 고치는 효소. 정제된 DNA ligase는 유전자 클로닝 작업에서 DNA분자들을 서로 연결시키는데 사용된다.
①-2 ligation 실험에서 중요한 요소 : 반응액에서 DNA분자의 end 농도이며 이는 ligase의 기질로 작용하기 때문이다.

② 제한효소로 절단된 부위 붙이는 방법: Ligase가 DNA를 붙인다고 하는 것은 DNA 끊어진 부분 즉 5'Phosphate와 3'OH를 연결하는 것을 말한다. Blunt end의 경우 조건을 약간 달리하면(낮은 온도, 높은 효소농도, 오랜 시간) 붙일 수 있지만 Overhanging된 단일가닥의 DNA가 Cohesive(Sticky)가 아닌 경우, 즉 예를 들어 서로 다른 효소 등으로 잘려 염기간의 상보적 결합이 없는 OVerhanging구조를 보이는 경우, Ligase가 작용할 가능성은 거의 없다. Ligase가 작용하기 위해서는 위에서 말한 끊어진 두 가닥의 5'말단과 3'말단이 만나야 하는데 Cohesive end의 경우라면 쉽게 만나겠고 Blunt end의 경우 어렵지만 가능성이 있겠지만 전혀 다른 Overhannging구조라면 만날 가능성이 거의 없다고 봐야 할 것이다.

참고자료

· ④http://kin.naver.com/browse/db_detail.php?dir_id=110205&docid=400357