유전학, 생명공학, PCR 리포트 (유전자 클로닝과 DNA 분석)

목차

Ⅰ. 실험목적
Ⅱ. 배경지식
Ⅲ. 실험
Ⅳ. 결과
Ⅴ. 고찰

본문내용

본 실험에서는 blue-white screening과 colony PCR을 활용하여 EGFP insert의 삽입 여부를 확인하였다. 나의 샘플인 White colony 3번은 약 1000 bp의 단일 밴드가 명확하게 확인되었으며, 이는 목적 insert(EGFP)가 성공적으로 vector에 삽입되었다고 볼 수 있다. 밴드의 크기와 선명도가 기준에 부합했기 때문에 cloning이 성공적으로 수행된 샘플로 판단할 수 있다. 하지만 다른 샘플들은 몇 가지 특징적인 문제들이 나타났다. 우선 White colony 1번의 경우 1000 bp와 100–200 bp 밴드가 동시에 관찰되어 단일 colony를 picking하지 못하여 주변의 blue colony가 함께 섞여 들어간 것으로 판단된다. 이는 colony picking 과정에서 white colony와 blue colony의 경계가 명확하지 않았기 때문으로 보인다. 또한 White colony라 생각했던 4, 5, 6번은 EGFP가 삽입되지 않은 밴드만 나타났으며, 실제로는 매우 연하게 보이는 blue colony였을 가능성이 있다고 생각된다. blue colony는 반드시 진하게 파란색으로만 나타나는 것이 아니기 때문에, 일반적으로는 picking 전에 light box나 lightboard를 활용하여 colony 색을 정확히 확인하는 것이 권장된다. 본 실험에서는 편의성을 위해 바로 picking을 진행했기 때문에 이러한 오차가 발생한 것으로 보인다.
결과적으로, colony PCR은 insert 유무를 빠르게 확인할 수 있는 효과적인 방법임을 확인할 수 있었다. 나의 3번 샘플은 기대한 밴드의 형태를 보였고 cloning이 성공적이었으며, 다른 샘플들의 결과는 colony picking 과정에서의 정확성, 특히 blue-white colony의 색상 판별과 단일 colony 확보의 중요성을 보여주는 사례였다고 생각 할 수 있다.

참고자료

· 없음