현대생물학실험1 3차 풀레 효소 활성 분석(A0)

소개

"현대생물학실험1 3차 풀레 효소 활성 분석(A0)"에 대한 내용입니다.

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Meterial & Method
4. Results
5. Discussion
6. Reference

본문내용

1. Abstract
본 실험은 β-galactosidase가 ONPG를 가수분해하는 효소 반응에 있어서 온도, pH, 기질 농도를 변화시켜 반응 속도를 측정해 효소의 활성을 알아보는 것을 목적으로 한다. 효소는 생체 단백질 촉매로 기질 결합 부위인 활성 부위를 가지며 이는 기질 특이성을 보인다. 효소의 활성은 온도, pH, 기질 농도에 영향을 받는데 온도는 반응 속도 상수와 단백질의 3차 구조에, pH는 활성 부위의 아미노산 잔기와 효소의 자체 구조에 영향을 미친다. 기질의 농도가 높을수록 효소의 활성은 크게 나타나지만 일정 수준에 이르면 효소 포화로 인해 반응 속도가 일정한 V_max에 도달한다. 본 실험에서는 420 nm에서 특이적인 최대 흡광도를 가지고 염기성에서 노란색을 띠는 ONPG를 기질로 사용하였다. β-galactosidase와 ONPG의 반응에 온도, pH, 기질의 농도에 차이를 주고 5 min 간격으로 반응시킨 후(total 25 min) 강염기인 〖Na〗_2 〖CO〗_3로 반응을 종결시킨 다음 420 nm에서 흡광도를 측정하는 과정으로 효소 반응 속도를 도출했다. A=εcl 수식에서 c값에 희석 배수를 곱해 V_0를 구하였다. 실험 결과 β-galactosidase의 최적 온도는 36~37℃, 최적 pH는 pH 7.3이었으며, 이는 문헌의 이론과 동일하였다. 기질 농도에 따른 반응 속도에서는 500 μM sample을 제외하고 기질의 농도가 증가하면 반응 속도도 증가하는 것을 확인하였다. Michaelis-Menten equation은 V_max와 K_m를 구하기 어려워 역수를 취한 Lineweaver-Burk plot에서 V_max는 31.75 μM/min, K_m은 1336.1 μM임을 확인하였다. 실험에서 발생한 오차는 pipetting과 buffer의 용량에 따른 것이라 예상하며, 이를 줄이기 위해서는 실험자의 숙련된 pipetting이 요구된다.

참고자료

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