[세포생물학및실험] Enzyme digestion (A+)

목차

1. 서론 (Introduction)
2. 재료 및 방법 (Materials&Methods)
3. 결과 (Result)
4. 고찰 (Discussion)
5. 참고문헌 (Reference)

본문내용

이번 실험은 미니프렙을 통해 얻은 plasmid DNA를 NheⅠ과 BamHⅠ 제한효소로 절단한 뒤, 삽입 유전자의 도입 여부를 전기영동을 통해 확인하는 것을 목적으로 한다.

클로닝(cloning)은 과학자들이 생물체의 유전 정보를 정확히 복제하는 기술을 의미한다. Molecular cloning은 다양한 생물 종으로부터 DNA 염기서열을 분리하여, 원하는 서열을 보통 벡터(vector)라고 불리는 DNA 분자에 삽입하는 과정을 말한다. 이러한 분자 클로닝 기술은 제한효소(restriction enzyme)의 개발로 빠르게 발전하였으며, 최근에는 제한효소보다 더 정밀하고 세밀한 DNA 절단 기술들이 등장하고 있다.
제한효소는 제한 내부핵산 가수분해효소(restriction endonuclease)라고도 불리며, 이중 가닥 DNA에서 특정 염기서열을 인식하여 해당 부위 또는 인접한 부위를 절단한다. 이러한 효소는 세균이 박테리오파지(bacteriophage)의 침입으로부터 스스로를 방어하는 기작에서 유래되었다. 제한효소가 인식하는 염기서열은 일반적으로 회문구조(palindrome)라 불리는 특수 서열로, 5’에서 3’ 방향으로 읽었을 때 동일한 염기 배열을 갖는 구조이다.
DNA 절단 후 생성되는 말단의 형태에 따라 평활 말단(blunt end)과 점착 말단(sticky end)으로 구분된다. 평활 말단은 DNA 분자의 양쪽 가닥이 동일한 위치에서 끊어져 돌출된 단일 가닥이 존재하지 않는 직선적인 형태이다. 반면, 점착 말단은 한 가닥의 DNA가 더 길게 절단되어 돌출된 단일 가닥 서열을 가지며, 이 서열은 상보적인 염기 서열과 상호 결합할 수 있는 특성을 가진다. (1)(2)
현재까지 밝혀진 제한효소는 크게 Type Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ로 분류된다. Type Ⅰ 제한효소는 제한효소와 메틸화효소(methylase)가 복합체 형태로 존재하며, 인식 부위와 절단 부위가 서로 다르다.

참고자료

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· https://blog.addgene.org/plasmids-101-how-to-verify-your-plasmid addgene ‘Plasmids 101: How to Verify Your Plasmid Using a Restriction Digest Analysis’
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· https://www.neb.com/en/products/restriction-endonucleases New England Biolabs (NEB) ‘Restriction Endonucleases’
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· https://www.addgene.org/protocols/restriction-digest/ addgene ‘Restriction Digest of Plasmid DNA’
· https://www.neb.com/en/products/m5505-user-enzyme New England Biolabs (NEB) ‘USER Enzyme’
· https://terms.naver.com/entry.naver?docId=5569122&cid=61233&categoryId=61233 네이버 지식백과 - 분자∙세포생물학백과 ‘제한효소’
· https://terms.naver.com/entry.naver?docId=5894293&cid=61232&categoryId=61232 네이버 지식백과 – 미생물학백과 ‘전기영동’