Experiment10 - HPLC 건국대 재료합성실험 레포트

목차

1. Introduction
2. Experimental
3. Result & Discussion
4. Conclusion
5. Reference

본문내용

1) Purpose of the experiment
HPLC의 원리를 이해하고, Caffeine 500μM의 stock solution을 통해서 125μM, 250μM, 375μM, 500μM의 standard caffeine solution을 통해서 HPLC를 통해 각각의 concentration의 peak area를 통한 Calibration curve를 통해서 KANU 9(g/L)에 포함된 Caffeine의 농도를 구하여 본다.
2) Theoretical background
Normal phase/reverse phase HPLC [1]
Stationary phase에 nonpolar/polar한 물질을 사용하여 혼합물질과의 상호작용을 통해서 분자의 극성에 따라 분리하는 방법이다.
Normal phase chromatography는 Hydrophilic한 stationary phase를 사용하여서 보통 유기 물질을 분리하는데 사용한다. Hydrophilic한 sample을 사용할 경우, stationary phase와의 interaction이 강해서 물질이 잘 이동하지 않는다. (즉 hydrophilic할수록 늦게 나온다.-retention time 증가) 이때 mobile phase는 hydrophobic한 용매를 주로 사용하는데,
Mobile phase가 polar한 경우, mobile phase와 stationary phase와의 interaction의 증가함으로써, Sample과 stationary phase와의 interaction이 감소하게 된다. 따라서 sample과 stationary phase와의 interaction의 감소로 retention time이 감소하여 전개가 빨리 진해되지만, interaction의 감소로 인해서 separation이 잘 안 될 수 있다. 따라서 혼합물의 물질을 적절히 분리할 수 있고, retention time 최소화할 수 있는 적절한 mobile phase를 이용하여야 한다.
Reverse phase chromatography는 Hydrophobic한 stationary phase를 사용하여서 보통 Hydrophilic한 생물 분자를 분리하는데 사용된다. Normal phase chromatography와 반대로 Hydrophobic한 sample을 사용할 경우, stationary phase와의 interaction이 강해서 물질이 잘 이동하지 않아 분리가 어렵다.

참고자료

· https://www.sciencedirect.com/topics/immunology-and-microbiology/reverse-phase-high-performance-liquid-chromatography Normal phase/reverse phase HPLC(2024-12-03)
· ICSC 0405 - 카페인, https://en.wikipedia.org/wiki/Caffeine Caffeine(2024-12-03), ICSC 0057 - 메탄올 Methanol (2024-12-03)