서강대 현대생물학실험4 실험2 Wnt/beta-catenin signaling activation

소개

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목차

1. Abstract
2. Materials and methods
3. Intro
4. Results
5. Discussion
6. Reference

본문내용

1. Abstract
본 실험은 LiCl 처리 유무에 따른 HEK293T 세포 내 β-catenin 발현 차이를 비교하기 위해 β-catenin plasmid 벡터를 PEI를 이용해 transfection하고 분석하는 것이 목표다. Transfection은 외부 유전자를 진핵 세포 내에 도입하는 방법이며, 본 실험에서는 PEI(polyethylenimine)를 사용하였다. Transfection 후 cell lysis를 통해 단백질을 추출하고 정량화하여 Western blotting을 통해 β-catenin 발현량을 분석했다. LiCl은 GSK3 저해제로 Wnt 신호 경로를 활성화시켜 β-catenin의 안정화와 발현 증가를 유도한다. Ponceau S 염색 결과, LiCl을 처리하지 않은 세포의 단백질 밴드가 전체적으로 더 진하게 나타났다. 이는 LiCl 처리로 인해 세포에 가해진 스트레스 반응으로 일부 단백질의 발현이 증가하거나 감소한 결과일 가능성이 있다. 본 실험에서 β-catenin 발현량의 상대적 intensity는 LiCl 미처리군에 비해 LiCl 처리군에서 1.61배 증가한 것으로 관찰된다. 실험 개선을 위해 다음과 같은 방법을 생각할 수 있다. 먼저 PEI와 플라스미드 농도의 최적 비율을 조정해 transfection 효율을 높이고GFP 형광 현미경 관찰을 통해 최적의 PEI 농도를 알아낼 수 있다. 또한 LiCl 농도와 처리 시간을 조정해 β-catenin의 안정성을 높이는 방법을 찾을 수 있다. ImageJ 분석 시 배경 신호를 보정하여 데이터의 정확성을 높이고, 반복 실험을 통해 평균값을 도출해 통계적 검증을 통해 실험 결과의 신뢰성을 얻을 수 있을 것이다.

참고자료

· Kaiser M, Edemir B. Lithium Chloride and GSK3 Inhibition Reduce Aquaporin-2 Expression in Primary Cultured Inner Medullary Collecting Duct Cells Due to Independent Mechanisms. Cells. 2020 Apr 23;9(4):1060. doi: 10.3390/cells9041060. PMID: 32340354; PMCID: PMC7226097.
· Liu, J., Xiao, Q., Xiao, J. et al. Wnt/β-catenin signalling: function, biological mechanisms, and therapeutic opportunities. Sig Transduct Target Ther 7, 3 (2022). https://doi.org/10.1038/s41392-021-00762-6
· Bonnet C, Brahmbhatt A, Deng SX, Zheng JJ. Wnt signaling activation: targets and therapeutic opportunities for stem cell therapy and regenerative medicine. RSC Chem Biol. 2021 Jun 1;2(4):1144-1157. doi: 10.1039/d1cb00063b. PMID: 34458828; PMCID: PMC8341040.
· Kanthamneni N, Yung B, Lee RJ. Effect of Eudragit on In Vitro Transfection Efficiency of PEI-DNA Complexes. Anticancer Res. 2016 Jan;36(1):81-5. PMID: 26722030.