인간 유방암 세포주를 이용한 전기이동법(immunoblotting)

소개

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목차

1. 실험 목적
2. 실험원리 및 이론
3. 기구 및 시약
4. 실험 방법
5. 유의사항
6. 실험결과
7. 고찰
8. 참고문헌

본문내용

1. 실험 목적
하전된 분자가 전기장에서 반대 전하 쪽으로 이동하는 현상을 이용한 전기영동(Immunoblotting)을 통해 인간 유방암 세포주 MCF27과 MDA-MB-231을 분리하고 전이능에 따른 vimentin 단백질 황성 유무를 비교, 분석할 수 있다.

2. 실험원리 및 이론1
2전기영동은 용액중의 전하를 전하를 띈 물질이 전기장 내에 서 이동하는 현상을 이용해생체 분자를 분리 및 분석하는 방법이다. peptide, 단백질, 핵산 (DNA, RNA) 등 수용액 속에서 ＋또는 −전하를 가진 생체 물질들이 직류 전기장 내에서는 그 성질 (형태나 하전 상태, 분자량 등)에 따라서 자신의 전하와 반대 전극을 향하여 이동하는 현상을 말한다.
3시료를 지자체에 적재하고 전기장을 걸어주면 하전 된 분자가 이동한다. 분자의 이동은 전기장의 세기, 지자체의 특성, 그리고 분리되는 분자의 크기, 모양 전하량 등의 물리적특성에 영향을 받는다.
4이러한 분자의 전기영동의 이동도 μ는 전위에 대한 입자의 속도 의 비가 된다. 전기영동의 이동도는 또한 분자의 알짜 전하 를 마찰계수 로 나눈 것과 같다. 따라서 다음과 같은 관계식을 통해 분자의 이동속도는 전기장의 세기와 분자의 전하량에 비례하고, 분자의 크기와 모양에 의해 결정되는 마찰계수에 반비례함을 알 수 있다.
전기영동에는 SDS-PAGE와 등전집중법, 이차원 전기영동 등이 있다.
SDS-PAGEsms 단백질 혼합용액으로부터 각각의 단백질을 분리할 떄 가장 널리 이용되는 방법으로 분자량이 상대적으로 작은 단백질은 polyacrylamide겔을 사용하고 상대적으로 분자량이 큰 DNA, RNA등은 agarose 젤이 이용된다.

참고자료

· 생화학실험 매뉴얼-전기영동법
· David L. Nelson/Michael M. Cox/대표역자 윤경식, 2023, 레닌저 생화학, 월드사이언스, p87-90
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· EMT 활성, https://www.kmpnews.co.kr/news/articleView.html?idxno=38447, 2024.11.18
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