생화학 실험 보고서 - 전기영동을 통한 단백질 관찰 (SDS-PAGE)

소개

생화학 실험 보고서입니다.

SDS-PAGE gel을 만든 후 전기영동으로 단백질을 관찰하였음.

목차

1. 실험목적
2. 이론
3. 실험 시약 및 기구
4. 실험 방법
5. 실험 결과
6. 고찰
7. 참고 문헌

본문내용

1. 실험목적
단백질을 분리, 분석하는 방법으로 젤 전기영동법을 학습한다. gel을 만들고, SDS-PAGE를 사용해 전기영동으로 단백질을 관찰한다.

2. 이론
단백질을 분리, 분석하는 방법으로는 기본적인 gel electrophoresis, 그의 응용인 isoelectric focusing, two-dimensional electrophoresis가 있다. Gel electrophoresis는 젤전기영동으로, 폴리아크릴아마이드나 녹말을 겔상태로 만들어 운반체로 이용하는 전기영동법이다. 이때 전기영동이란 전기장 내에서 용액 속의 하전된 물질들이 반대 전하의 전극을 향해 이동하는 현상을 뜻하며, 하전된 물질의 전하량, 크기, 모양, pH 등에 따라 이동하는 속도가 달라진다.
단백질에는 분자량에 거의 비례하여 SDS(Sodium dodecyl sulfate)가 결합하므로, polyacrylamide gel 내에서 전기영동하면 이동하는 속도에 차이가 발생한다. 폴리머인 acrylamide와 methylenebisacrylamide를 섞고, 반응을 시작하게 하는 persulfate, 촉매 TEMED를 첨가하면 polyacrylamide gel이 형성된다.
SDS는 계면활성제의 일종으로, 단백질에 대해 강력한 고친화성이 있어서 동일 중량 이상의 dodecylsulfate group이 결합하여 단백질을 변성시킬 수 있다. 단백질의 3차원 구조가 무너지고 황결합이 끊어지면서 단백질의 전체 charge는 negative 해지고, 전기영동으로 분리가 가능해지는 것이다.
전기장에서의 행동은 전하의 힘과 단백질의 모양에 영향을 받으므로, 단백질을 변성시키지 않고 3차 구조 그대로 전기영동하면 모양과 net charge에 의해 영향을 받는다.

참고자료

· 미생물학백과사전, 전기영동
· 생명과학대사전, 겔전기영동
· 생명과학대사전, 2차원 겔전기영동
· 생명과학대사전, 아크릴아마이드